**血站核酸实验室建设工作体会
李浩 孙雪梅 吴宗泽 （**市中心血站）
关键词：核酸检测实验室理检测结果
病毒核酸检测(NAT)效缩短检测窗口期检出献血者中存HBV隐匿性感染酶免检测形成良互补效降低输血相关传染疾病带风险目前世界许国家区均已开展血液核酸检测国2010年开始核酸检测试点工作2011年扩试点范围站作第二批核酸检测试点单位2011年底开始核酸实验室筹备工作2012年3月通省厅验收开始试运行核酸检测试运行期间核酸实验室建设运行情况验心家分享
1 前期准备
1．1 实验室建设 考虑存交叉污染站核酸实验室独立设置5楼（酶免实验室4楼）实验室参床基扩增检验实验室理办法求整实验室划分试剂储存准备室样品接收处理室样品制备室核酸扩增检测室报告室办公室六区域区配备专防护服鞋子清洁具物品颜色明确标识防混区域间安装线讲系统六区域条走廊区缓间隔开直接相通员通缓间单流动标通传递窗单流动扩增区污染性垃圾专医疗垃圾出口送出公走廊减少污染机会满足核酸检测实验室空气流求隔离血站楼原中央空调改造实验室时配套新建排风空调系统保证核酸扩增检测室处负压状态区域风流动符合规范
1．2 仪器选择 前期认真考察反复证综合考虑终厂家投放仪器设备方式引进两套诺华Tigris核酸检测系统两套系统互备份试运行期间出现仪器障法运行情形时备份核酸检测系统良保障工作利进行
1．3 员培训 核酸检测实验室配备专门检验员组织核酸检测实验员参加卫生部举办核酸检测培训班通严格考试取卫生部检中心颁发培训合格证书实验员岗前必须接受诺华培训员关实验原理仪器操作仪器维护等项目理实践培训位实验员独立模拟实验实际操作考核合格取授权岗
1．4 质量体系文件建设 根血站质量手册程序文件诺华厂家试剂操作说明结合实际工作情况建立起较完善实验室质量体系文件包括岗位职责工作流程操作规程相关记录等容全面注重细节确保实验操作规范流程清晰合理关键控制点准确效
达基条件血站申请河南省卫生厅专家组核酸检测实验室进行技术验收专家组核酸检测实验室设置设备设施环境员设备理检测方法标理记录报告质量控制等方面逐项进行认真检查严格评审认站实验室总体符合血站核酸检测试点实验室求利通验收挂牌
2 工作实践
通验收站便立开展核酸检测试运行工作试运行期间市区三采血点全血标进行核酸检测具体工作情况
2．1 标采集准备 具旁路留样系统血袋带分离胶EDTAK2抗凝BD真空采血留取核酸检测标25ml4时接血车4℃条件运送回站离心（
4℃1500g x 15min）离心置4℃冰箱保存48时诺华Tigris系统检测30℃冰冻保存留样暂未送样卫生部进行复查
2．2 实验流程 实验前必须仪器表面工作台面进行消毒然开仪器启动仪器预排空日维护程序优化流程仪器动进行维护时开始准备标进样架：校准质控品解冻标起衡室温次性纸巾包裹着试盖先**性校准质控盖子摆放进样架相应位置样试塞样够程度避免气溶胶扩散造成污染述操作必须做安全防护实验员生物安全柜中进行操作仪器处理标耗材时双手套必须求时更换手套注意手套接触试口已开盖试方移动等细节预防污染发生[1]
日维护仪器进入机状态试剂中加入标装载试剂样创建工作列表开始实验加样开始密切关注仪器运行状态时添加耗材继样提示报警时反应加样完毕阳性校准质控须加塞弃灌注84消毒液废液瓶中样盖试塞暂存4℃冰箱检测完成记录检测结果印实验报告错误障导致效结果检重做阳性标进步进行HBVHCVHIV分项鉴实验阴性样弃医垃圾袋中胶带封口时专出口移垃圾回收点避免实验室遭受污染
2．3 清洁维护 天实验结束进样架必须求10 84溶液浸泡15分钟清洗干净仪器表面实验台面传递窗掉渣次性医棉纱10 84溶液擦拭15分钟纯水彻底清洁避免残留84造成污染金属部分酒精擦拭避免腐蚀仪器面区专拖2 84消毒液清洁清洁序试剂储存室样品处理室样品制备室核酸扩增检测室清洁区污染区原进行清洁完成开紫外灯消毒60分钟程度预防污染[2]
严格仪器操作说明求进行日维护周维护月维护类硬件障必须时报修处理半年厂家工程师进行仪器校准确认设备始终处良工作准备状态
3 阶段结
3．1 检测结果 3月试运行开始7月初站核酸实验室检测标4981份初检核酸阳性酶免阴性样10例中4例鉴HBV阳性1例初检阴性次进行复查鉴证实HBV阳性酶免阴性核酸阳性报告率约01高混样检测阳性检出率[4] 国部分区报道基致[3]试运行期间站参加卫生部床检验中心开展核酸检测室间质评次成绩合格
5例核酸阳性说明核酸检测血液安全提升确实显著意义1例假阴性说明核酸检测然提高检测灵敏度然存漏检风险日常工作中更做认真细致严格实验求进行操作提升实验质量水防止阳性标漏检
3．2 心体会 通试运行期间工作诺华Tigris系统进行血液筛查优缺点定体会诺华Tigris系统集标加样核酸提取扩增检测体全动检测系统占空间动化程度高操作简单方便关键控制点清晰明易规范化减少差错事发生设备封闭性加样扩增产物灭活垃圾干湿分离均仪器部动进行抗污染力强单份检测模式试剂灵敏度较高HIVHCVHBV95检测限分50 IUml3 IUml10
IUml单份检测酶免检测步进行缩短血液放行时间
诺华Tigris系统规模血液筛查设计做定性测试试点期间科研摸索数收集较利Tigris系统次试验必须做13校准质控鉴实验做24校准质控样量时候检测成较高外动化程度高系统求严格仪器障员误操作引起某错误时会导致仪器终止运行站试运行初期总发生4次导致整实验终止仪器障百份试剂报废工程师维修调试运行状况已较稳定已连续2月没重障发生
3．3 改进目标 试运行阶段积累验总结教训进行思考会工作中进行改进：参考****等血站做法[3] 初检核酸阳性样做2次复检复检1次阳性样确定阳性血液直接报废阳性样20℃冻存段时间统进行鉴样提高鉴率节省量试剂二逐步扩展试运行检测范围单采血板纳入核酸检测试运行探讨研究保存期较短血板核酸检测工作模式三增加核酸阳性献血者追踪工作采样进行进步研究确定该献血者窗口期感染隐匿性乙肝
4 结语 站言核酸检测项全新工作充分发挥积极性创造性方便工作原防止污染关键保证质量根深入探索认真做实验室建设工作细节问题达确保核酸检测质量提升血液安全水目
参考文献
[1]李文王欢王红血站核酸检测实验室建设理细节问题中国输血杂志2011 24(7) 553554
[2]邹峥嵘谢云峥林俊杰采供血机构开展病毒核酸检测关键控制点初探 中国输血杂志2011 24(3) 177178
[3]邓雪莲安万新梁晓华**市血液中心血清学检测核酸检测行效果观察中国输血杂志2012 25(1) 3840
[4]劲峰许晓均李活核酸血筛献血者常规筛查中应研究中国输血杂志2011 24(7)556559
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李浩 孙雪梅 吴宗泽 （**市中心血站）
关键词：核酸检测实验室理检测结果
病毒核酸检测(NAT)效缩短检测窗口期检出献血者中存HBV隐匿性感染酶免检测形成良互补效降低输血相关传染疾病带风险目前世界许国家区均已开展血液核酸检测国2010年开始核酸检测试点工作2011年扩试点范围站作第二批核酸检测试点单位2011年底开始核酸实验室筹备工作2012年3月通省厅验收开始试运行核酸检测试运行期间核酸实验室建设运行情况验心家分享
1 前期准备
1．1 实验室建设 考虑存交叉污染站核酸实验室独立设置5楼（酶免实验室4楼）实验室参床基扩增检验实验室理办法求整实验室划分试剂储存准备室样品接收处理室样品制备室核酸扩增检测室报告室办公室六区域区配备专防护服鞋子清洁具物品颜色明确标识防混区域间安装线讲系统六区域条走廊区缓间隔开直接相通员通缓间单流动标通传递窗单流动扩增区污染性垃圾专医疗垃圾出口送出公走廊减少污染机会满足核酸检测实验室空气流求隔离血站楼原中央空调改造实验室时配套新建排风空调系统保证核酸扩增检测室处负压状态区域风流动符合规范
1．2 仪器选择 前期认真考察反复证综合考虑终厂家投放仪器设备方式引进两套诺华Tigris核酸检测系统两套系统互备份试运行期间出现仪器障法运行情形时备份核酸检测系统良保障工作利进行
1．3 员培训 核酸检测实验室配备专门检验员组织核酸检测实验员参加卫生部举办核酸检测培训班通严格考试取卫生部检中心颁发培训合格证书实验员岗前必须接受诺华培训员关实验原理仪器操作仪器维护等项目理实践培训位实验员独立模拟实验实际操作考核合格取授权岗
1．4 质量体系文件建设 根血站质量手册程序文件诺华厂家试剂操作说明结合实际工作情况建立起较完善实验室质量体系文件包括岗位职责工作流程操作规程相关记录等容全面注重细节确保实验操作规范流程清晰合理关键控制点准确效
达基条件血站申请河南省卫生厅专家组核酸检测实验室进行技术验收专家组核酸检测实验室设置设备设施环境员设备理检测方法标理记录报告质量控制等方面逐项进行认真检查严格评审认站实验室总体符合血站核酸检测试点实验室求利通验收挂牌
2 工作实践
通验收站便立开展核酸检测试运行工作试运行期间市区三采血点全血标进行核酸检测具体工作情况
2．1 标采集准备 具旁路留样系统血袋带分离胶EDTAK2抗凝BD真空采血留取核酸检测标25ml4时接血车4℃条件运送回站离心（
4℃1500g x 15min）离心置4℃冰箱保存48时诺华Tigris系统检测30℃冰冻保存留样暂未送样卫生部进行复查
2．2 实验流程 实验前必须仪器表面工作台面进行消毒然开仪器启动仪器预排空日维护程序优化流程仪器动进行维护时开始准备标进样架：校准质控品解冻标起衡室温次性纸巾包裹着试盖先**性校准质控盖子摆放进样架相应位置样试塞样够程度避免气溶胶扩散造成污染述操作必须做安全防护实验员生物安全柜中进行操作仪器处理标耗材时双手套必须求时更换手套注意手套接触试口已开盖试方移动等细节预防污染发生[1]
日维护仪器进入机状态试剂中加入标装载试剂样创建工作列表开始实验加样开始密切关注仪器运行状态时添加耗材继样提示报警时反应加样完毕阳性校准质控须加塞弃灌注84消毒液废液瓶中样盖试塞暂存4℃冰箱检测完成记录检测结果印实验报告错误障导致效结果检重做阳性标进步进行HBVHCVHIV分项鉴实验阴性样弃医垃圾袋中胶带封口时专出口移垃圾回收点避免实验室遭受污染
2．3 清洁维护 天实验结束进样架必须求10 84溶液浸泡15分钟清洗干净仪器表面实验台面传递窗掉渣次性医棉纱10 84溶液擦拭15分钟纯水彻底清洁避免残留84造成污染金属部分酒精擦拭避免腐蚀仪器面区专拖2 84消毒液清洁清洁序试剂储存室样品处理室样品制备室核酸扩增检测室清洁区污染区原进行清洁完成开紫外灯消毒60分钟程度预防污染[2]
严格仪器操作说明求进行日维护周维护月维护类硬件障必须时报修处理半年厂家工程师进行仪器校准确认设备始终处良工作准备状态
3 阶段结
3．1 检测结果 3月试运行开始7月初站核酸实验室检测标4981份初检核酸阳性酶免阴性样10例中4例鉴HBV阳性1例初检阴性次进行复查鉴证实HBV阳性酶免阴性核酸阳性报告率约01高混样检测阳性检出率[4] 国部分区报道基致[3]试运行期间站参加卫生部床检验中心开展核酸检测室间质评次成绩合格
5例核酸阳性说明核酸检测血液安全提升确实显著意义1例假阴性说明核酸检测然提高检测灵敏度然存漏检风险日常工作中更做认真细致严格实验求进行操作提升实验质量水防止阳性标漏检
3．2 心体会 通试运行期间工作诺华Tigris系统进行血液筛查优缺点定体会诺华Tigris系统集标加样核酸提取扩增检测体全动检测系统占空间动化程度高操作简单方便关键控制点清晰明易规范化减少差错事发生设备封闭性加样扩增产物灭活垃圾干湿分离均仪器部动进行抗污染力强单份检测模式试剂灵敏度较高HIVHCVHBV95检测限分50 IUml3 IUml10
IUml单份检测酶免检测步进行缩短血液放行时间
诺华Tigris系统规模血液筛查设计做定性测试试点期间科研摸索数收集较利Tigris系统次试验必须做13校准质控鉴实验做24校准质控样量时候检测成较高外动化程度高系统求严格仪器障员误操作引起某错误时会导致仪器终止运行站试运行初期总发生4次导致整实验终止仪器障百份试剂报废工程师维修调试运行状况已较稳定已连续2月没重障发生
3．3 改进目标 试运行阶段积累验总结教训进行思考会工作中进行改进：参考****等血站做法[3] 初检核酸阳性样做2次复检复检1次阳性样确定阳性血液直接报废阳性样20℃冻存段时间统进行鉴样提高鉴率节省量试剂二逐步扩展试运行检测范围单采血板纳入核酸检测试运行探讨研究保存期较短血板核酸检测工作模式三增加核酸阳性献血者追踪工作采样进行进步研究确定该献血者窗口期感染隐匿性乙肝
4 结语 站言核酸检测项全新工作充分发挥积极性创造性方便工作原防止污染关键保证质量根深入探索认真做实验室建设工作细节问题达确保核酸检测质量提升血液安全水目
参考文献
[1]李文王欢王红血站核酸检测实验室建设理细节问题中国输血杂志2011 24(7) 553554
[2]邹峥嵘谢云峥林俊杰采供血机构开展病毒核酸检测关键控制点初探 中国输血杂志2011 24(3) 177178
[3]邓雪莲安万新梁晓华**市血液中心血清学检测核酸检测行效果观察中国输血杂志2012 25(1) 3840
[4]劲峰许晓均李活核酸血筛献血者常规筛查中应研究中国输血杂志2011 24(7)556559
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