利组织培养技术筛选辣椒
抗疫病变异体
齐飞巩振辉黄炜
(廉北农林科技学E1艺学安•陕丙畅凌712100)
r« S］选2OO1 2O56J2O313辣戡品沖作试材•子叶作外柚体诱导愈伤姐纨•辣戡疫 狷榴廉藏培养建蔽制取作筛选剂•席选辣壇抗疫病细胸变界系纳果表明•辣檄疫病病煤椒 子叶愈伤组织诱辱生长定芽分化具显着抑制作•抑制作度堆加堆加• 辣椒品种愈伤组织毒素忍耐力
［■关■闻〕疫筋病晾蔚粗毎变异系愈伤组织
［中图分类号］S641303 53 ［文敵标识矶］A ［文韋细号］16719387(2006)02008306
辣械疫病危霑辣椒生产病害 • 世界许国家发生该病害定辣椒疫病病原 菌(Phylophthora capsici)引起种毁灭性土传病 害苗期成株期辣椒均伤害茎叶果实均 发病•传播速度极快常致发病田绝产•造成 严重济损失利化学药剂植株部进行 喷施防治传统方法仅污染产品环境•防 治效果较差采常規育种杂交育种技术进 行辣椒抗疫病育种工作•具脊种周期较长难 短时间获优质抗病品种缺点•寻求 种新效果周期短抗病育种途径•已成辣 掀高产优质抗病育种研究噫点
年植物离体培养篩选细胞突变体技术迅 速发展国外已建立较完善利组织培养 技术•离体筛选抗逆种质新方法植物抗病 抗草剂附盐胁迫抗金属离子棣性育作物 品质改良等方面取喜成•获母突 变体材料⑴诱导成功筛选出辣椒抗疫病 体细胞变异性系国外尚未见报道基• 试验建立完善辣嫩抗疫病体细胞变异性系诱 导筛选体系•基础获抗疫病体细胞 变异株系•加速辣椒抗疫病新品种选育 推广农业持续性发展具虫理实 践意义
1材料方法
1・1材料
选取树20012056203L3辣椒品种 (系)作试材•中品种2001市售种•品系 2056203西北农林科技学园艺学院辣椒 种质资源育种课题组提供3供试材料均辣 拟疫病感病品种(系〉
辣椒疫病病原菌陕西杨凌分离菌株辣 愎愈伤组织诱导分化培养基(MS+质fit分数3 蔗 黯+质罐分数06 琼脂+ 5 0 mgL BA + 0 5 mgL IAA)ffi 1 moIL NaOH 1 moIL HCI 调 pH5・8•0・10〜0・15 MPa压力121〜126 C高温灭菌20 miru愈伤组织诱导定 芽分化
1・2方法
121躱救苗苗获 精选辣椒种子 55 C温水浸泡2 h体积分数70 酒箱稷泡40 质址分数2 次氯酸例溶液消稚30 min菌水漂 洗3〜4次接种MS+质分数3 蔗糖十质敌 分数0・6 琼脂培养基(pH 58)S光 2 000 Lx(14d)白天26 C晚20 C条件发芽 培育成苗
122 嫌椒疫炳病原荫粗奉素制备 辣椒疫病
［ttMR 期］200S0608
［慕金项R］国家白然科学茎金項目(30571262)北农林科枝宁遗传育种专項(O5YZO241) ［ffata介〕齐 飞女・次西汉中•橫士•宴事农立生詢技术«»
〔通讯作右〕巩振矫〈1957—>・男•陕四礼泉•氢厲・博士•博士生特紳•事蔬菜种植贵卑生物技术研究• Enuil igzhhl63@yahoo ・ com cn
滞原 （Phytophthora ca>sici Leonian）^ 进行液体 培养材7 d接种PDA固体培养基进行繁殖 鉴定挑取5块农径8 mm单繭菊落接种100 m•胡妙卜汁培养液中（CFB）g 27 C黑暗条件 110120 rminfis荡培养18d双层灭菌滤 纸滤荫丝体•滤液4 000 rmin离心20 min• 淸液煮沸滤辣椒疫病病原菌粗毒素
1 2 3 媒奴疫病病原苗根*索•檢椒子叶愈伤组 织讲字形旳 分选取3辣椒品种12 d苗龄 幼苗子叶•接种粗秦索体积分数分0 10 20 30 40 50 60 筛选培养 基•毎处理50外植体接种时外植体伤口培 养基表面充分接絶•繭苗生长条件：温度20〜 25 C •光2 000 Lx 14 h光10h 愈伤组织 诱导继代分化培养条件：温度20〜25 C•光 2 000 LxH h光0 h暗20 d分统计试验 材料愈伤组织诱导率发佇状态
1 2 4 辣椒疫病病原苗相#素林椒愈伤组织增 殖影响 分选取3辣椒品种12 d苗龄幼苗 子叶接种分化培养基•毎处理100外植体 接种时外植体伤口培养菇表充分接触•培养条 件123培养20 d愈伤组织外杭体伤口 处切•转接粗裨素体积分数10 筛选培养 基继代筛选堆养•精确度0・001 K天称 議处理材料愈伤组织鲜垂培养20d^・ 选择3品种未褐化生长明显愈伤组织•转接 粗毒素体积分数20 筛选培养基进步 继代筛选培养•梢确度0・001 g天称 材料愈伤组织鳞电・20 d1粗毒寮浓度筛选 周期•食伤纽织筛选粗毒索体积分数高 60 粗毎索筛选周期•观察材料 处理愈伤组织生长状态•称秋愈伤组织鮮 重肿算愈伤组织増殖率计算公式F：
愈伤组织增殖率□（（培养愈伤组织址 转入愈伤组织墮）转入愈伤组织fi）xioo
125 辣椒疫病病原菌祖命素林椒愈伤组织分 化影响 方法124毎粗潅索体积分数 籀选周期•均统计材料冬处理定芽分化 率毎愈伤组织存活率定芽生长状态
126 抗性细胞系筛选稳定性養定 分 3品种粗毒索体积分数60 筛选培养基 生长愈伤组织•转接毒索协迫MS培养基 维代增殖4次•洶汰粗恋素嗜适应细胞 分M200r＼M2056＼2031抗性变异系 系转接粗毒喫体积分数60 筛选培养基 进行培养•研究抗性性系抗巌素性统计 处理愈伤组织存活率愈伤组织增殖率占 127扶性胞系植株生 抗性愈伤组织 分化定芽丛分割•转芽伸长培养基•培养条 件l・2・314d继代I次定芽叶片开展•时 茎伸长定芽长23 cm时•基部 切卜••插入生根培养基中诱导生根•长成发达根 系•移盛菜园土蛭石（质械1二1）肯 养钵中保湿培养
2结果分析
2 1練椒疫病病原茵粗■素猱議子叶敌伤组 诱导形响
山表1岀•辣椒愈伤组织诱导率86希辣 椒疫病病原菌粗毎素浓度升髙降低辣椒疫 病病原帝粗靈素体积分数10 时「2001 20562031愈伤组织诱导率分90 ■ 88 86 粗毒素体积分数60 时・ •2OOLJ2O56愈伤组织诱导率分4 2 ■2031粗诱索体积分数50 时已 愈伤组织产生说明辣椒疫病病原菌粗枣索辣 揪愈伤组织强烈褂害作粗滞素体枳分 数0处理外•粗奉索体积分数相条件• 2001愈伤组织诱导率明显髙M2O31 ＼说明 辣椒品种愈伤组织襌索忍耐力 2001粗奇素忍耐力强广2031弱试验 发现•生长花含粗磁集培养基3辣椒 品种•愈伤组织均出现程度悔化•粗毒 素体枳分数越高•福化现氟越严电
22猱椒疫病病原■粗■素伤组织增殖
表2知辣椒疫病病原菌粗廓素筛选辣 緻愈伤组织时•粗毒索体积分数升奇•愈伤组织 受抑制程度增强粗毒素体积分数10 时广2001貫205603愈伤组织生长状况良 •新鲜均匀疏松•淡绿色•愈伤组织增弟率分 896 88 9 86・2・粗產索体积分数 60 时•仅愈伤组织存活广2001化2056 H2O31w愈伤组织增殖率分1& 7 153 1・6
»1問体积分敷粗•康UMt子叶愈伤組织诵辱影*
Table 1 Effect of crude toxin on inducement of callus of pepper
体积分数 Crude toxin
concfn iraiionH
Variety
外植体敗 No of explancs
魚伤 组妃数 No of callus
金伤组级 携卄 Rate of callus induced
体积分效 Crude foxin
concen* traiionK
品种
Variety
ft ft 外
No of explantn
倉伤
No of callus
金伤组块
Rme of callus tnduerd
200
50
50
100
2001
50
1)
22
0
2056
50
49
98
40
2056
50
7
U
203
50
50
100
2031
50
5
to
2001
50
45
90
2001
50
5
to
10
2056
50
44
88
50
2056
50
3
6
2031
50
43
86
2031
50
I
0
2001
50
34
68
2001
SO
2
4
20
2056
50
30
60
60
2056
50
1
2
2031
50
28
56
2031
50
0
0
200)
50
25
50
30
2056
50
20
40
2031
50
17
34
«2 伤组织增療序*
Table 2 Effect of crude toxin on growth of callus of pepper
伟尉富％ 品种 i盘鵲 ＼ ^SSS SmS 蓟溜『
Crude toxin Variety Rate of growth Growth | Crude toxin Variety Rote of growth Growth
concent ratK>n«
of callun
«tate
concent rn lions
of cxllus
stjiie
2001
965
+ + + + +
200)
345
+ + +
0
2056
943
+ + + + +
40
2056
326
+ + +
2031
93・6
+ + + + +
2031
308
+ +
2001
896
+ + + + +
2001
209
+十
10
2056
889
+ + + + +
50
2056
19 H
+ +
2031
862
+ + + +
2031
5・9
+
2001
696
+ + + +
2001
167
+
20
2056
6& J
+ + + #
60
2056
153
2031
634
+ + +
2031
116
+
2001
502
+ + +
30
2056
48・6
+ +十
2031
409
+ + +
注+ + + +十@伤ffltHUHL赣鲜均匀欣松•湊结色・+ + + +・金伤IU9L负■较•较競勢疏松•黄绿色・+ + +・3愈伤A1CI质債幣
黄色i + 色)+・部分倉伤組伙福化死亡•确•存活
Note 十 + •♦• + + ・ means callus grows well ・ Kght green ■ + + + +・ mc«nx callus grows good ・ yellow・grecn + 4» + • mean 1 3 callus grows in bad condition・ycllovu + + ・mcan» 12 cullu* growjc in bud condition• yellowbrown + ・ mcenmost o( calluR died・
23練議疫詹病原VS««楝椒您伤组织分化 影响
表3知•辣锻疫病病原菌粗孝素显著抑 制辣椒子叶食伤组织分化定芽•君粗毎素体 积分数升高•愈伤组织存活率降低•定芽分化 率显苦降低粗雄素体积分数10 时 200r^2056w2031愈伤组织定芽存活率 分885 85 6 818 •分化率分
842 >82 3 7& 6 •时定芽生长基 正常长势较稍弱毒素体积分数60 时m2001＼m2056h2O3L愈伤组织定芽存活率 分15・8 ・14・5 & 6 •分化率分
«3体积分練複@伤组録分化影購
Table 3 Effect of crude toxin on differentiation of callus of pepper
102 8・1 4・3 •时定芽枯黄甚死 亡粗毒索203L定芽稚宮作强2 品种说明粗侮素辣徵品种定芽具 毒害作结果均表明•辣椒疫病病原菌粗 毒素辣織定芽分化生长强烈冬害作
体枳分败 Crude toxin concern rat ion
A#
VArieiy
化棋 R*ie of di(krcnU8iion of callu5
eftfii 织 定芽存活車 Rite of living callus
长状念
Growth Mute of call
200
95 ＼
1000
分化 Sirong differeniiation
0
2056
943
1000
分化 Strong Afferentialion
2031
905
9&0
分ft
Strong diffrrrntiAtion
2001
842
88・5
分化弱 Weak differrnimiion
10
2056
823
856
分化％ Weak differenlMKion
2031
78・6
Al8
分化 Wenk differeniiation
2001
756
784
停止分化 No differenuaiion
20
2056
731
775
停止分化 No diffcrcntuiion
2031
658
722
停止分化 No diffrrcntialMJn
200
60 4
63 H
雄殊岀现褐化
Basilar lis^ue npf»eared bruising
30
2056
593
612
基部岀
lifl
2031
539
526
B&Mlar (isMue bruised totally
2001
3& 8
S3 7
系部化
tU«ihr lixxuc brui^d tomlly
40
2056
365
295
化
liAxthr tixue bruised family
2031
29 7
239
化
Top of buds bruised toullv
2001
196
236
芽尖鸭化
Top of bod bruiMid lotally
50
2(156
168
212
芽尖甥化
Top of buds bruised totally
2031
114
154
枯貧死亡 Perished end died
2001
102
158
死亡
Pcn»hcd And died
60
2056
8・1
145
枯酋•死亡 Perished »nd died
2031
43
& 6
怙赏•死亡 Peris bed and dxd
24抗性细胞礙S定性分析
抗性细胞系稳定性分析结果见表4表4 知•辣椒抗疫病愈伤组织变异系系含 相体积分数粗磯素培养基培养时•两者存 活率增殖率存明显差异庄体枳分数60 粗毒亲培养基中培养时•抗性愈伤组织定 生长蜀受强抑制•2001・2056 2031抗性愈伤组织存活率分853 ■
838 809 •愈伤组织存活率分 8 9 ■&8 3・8 2001720562031 抗性愈伤组织增殖率分32・8 30・3 251 ■愈伤组织增值率分5・3 ■
48 4・3 结果均表明•粗毒索连续筛 选抗性细胞变异系辣椒疫病病原菌粗旅索 具稳定抗性种抗性否够稳定遗传 抗性细胞系生植株否抗病•需进步研究
证实
*4浹性fan*定性分析
Table 4 An^ly^is of resistibility of cell mutant lines
41* Variety
<伤率Rate of growth of callus
敢伤ttl织存沾車 Rate of living c^lluti of pepper
变# Trentmenl
CK
变异疾Treatment
頸紊CK
2001
328
53
853
& 9
2056
303
48
83・8
68
2031
251
43
809
38
25抗性细胞系植株生
试验获辣椒品种2001抗疫病生植株 15株获辣椒品种2056抗疫病生植株12株 获辣椒品种2031抗疫病生植採8株辣锻 抗疫病生植株抗病性鉴定进步研究
3讨
体细胞性系变异发生植物 器官组织细胞愈伤组织许利组织培养 进行植物育种研究发现•组织培养程中 发生丰富变异•处分化状态愈伤组 织•身体细胞性条变异原组织培 养新非常丰富遗传变异源泉 试验筛选方法足愈伤组织接种选择培养 基未原始材料进行诱变处理植物 病原毒索足病原菌产生奇性代谢产物寄植 物病害发生发展程中起明显致病作研 究3⑷表明•祗素仅植物组织器官毒害作 植物离体培养细胞明显毒害作 毒索作选择剂愈伤组织进行抗性筛选•获 抗性细胞变异系赵晓明等⑺番茄愈伤组织转 接含番茄早疫病粗命素培养基发现•毒索 浓度增加愈伤组织增殖率明显降低•褐化现第加 蛋刘进等⑹报道•辣椒疫離培养滤液胡感茎尖 丛生芽存活生长均右抑制作•滤液浓 度升高•茎尖丛生芽存活率生长率均降• 马龙彪铮⑼报道•甜菜褐斑病培菲滤液愈伤组织 诱导率生苗率均定抑制作研究 发现•辣椒疫病病原繭粗矗素辣椒愈伤组织 诱导增殖明显抑制作抑制作粗牡 素体积分数增加增强山见病原菌粗毎素 离体细胞确毎害作
抗崭育种中利毒索进行抗性籀选时关 憊问题确定毎素浓度处理方法果毒 索浓度高•材料死亡率•选择时易导致抗 性材料丢失（果浓度低•选择压力易选 出髙抗材料赵晓明等⑺报道•早疫病粗毒素筛选 番茄抗早疫病突变体时30 毒索浓度佳筛选 浓度刘进等⑴辣椒疫需培养滤液体外筛选 胡械抗瘟病性系时•选择粗毒索浓度50 作 选择剂压力限筛选出抗瘟病胡椒生植株吴 志凤等⑷认•组织培养中选择存活率5 时 毒亲浓度较合适试验辣椒疫病粗毒索 愈伤组织毒害作基础•结合辣锻疫病粗侮素 生物活性测定•综合评定认•粗帝素合适筛选诙 度体积分数60
筛选程中愈伤组织存活率会筛选 次数增加秦索浓度增加减少期 获较存活愈伤组织生植株•试脸接种 址外植体■定程度增加试验成 试验中•存活愈伤组织少悄况•进步 鉴定抗病性•存活愈伤组织切取部分愈伤 组织扩繁殖•取良效果
外筛选出抗性愈伤组织进行抗性稳定 性鉴定非箴必婴方面定选 择压力部分连续筛选次愈伤组织细胞仅 仅生理适应细胞•非遗传变异细胞•转入 正常培养基培养数代抗性会消失 外愈伤组织通常复杂细胞类型外植体诱 导产生初始生理遗传具致性愈伤 组织部生理特性细胞邻细胞缓 •逃脱选择压：方面部敏感细 胞抗性细胞包围•体外选择中存活 产生具抗性柏［株•敏感细胞 抗性细胞间通胞间连丝传递某联具抗性作 化合物表型聆敲作增加体外选择复杂 性然定程度通连续转接克服峽 点•愈伤组织进行抗性稳定性鉴定•助进 步确定筛选愈伤组织抗性细胞系・研 究筛选抗辣椒疫病细胞变异系海素培 养基继代4次•转接含体积分数60 粗於 素筛选培养墓发现•抗性愈伤组织定 生长•生长完全受抑制•说明粗 扇素连续筛选抗性细胞系辣椒疫病病原菌 粗福索具稔定抗性
总•利植物体细胞突变系进行抗性育种•缩 短仃种年限•广泛获具种优艮性状 突变系：F1前体细胞突变体筛选利方面•国 外已展开广泛研究•批具优良性状 品种（系〉应杂交育种生产中着细胞 工稈研究深入•利组织培养方法诱发变异•筛 选突变体•理实践具广阔師晟 深远意义°
[參考文敝]
[IJ刘进卩•迎木•体外性系变庄抗統仃井中aft200224(5)617^30
[2] Bchnk< Selecuon of potato callu* for rrj[3] FVhnke M〔4] Behnke M・ Sclcciwn of dihapled |x»aio callu* (or roiHiuncc io cuhurc (i|ir«lr of Fusurmm ujynpf^um[J] Z Pfhnzcnmcchi < 1980• 85s 254258
[5] Hartmnn (＼|・ Ukc* of alfnlU (mikv I > cell ruhurc to produce* ptnntic rcxi^iAni to FuMrium wih enuwed by Faianum 戶卜 f *p rwrcfi* Univ 1983・
[6 ＇ HnrlniAn C JMe Coy T J・Knou^ T R・ Selrclson of dhdhi (Mfdicu^ wjuj) cell line* ajxl rq^rnrrniion of phniA wjum 10 the toxim <*)prodiHed by k＇u^ifiaw ruy^rtm ( sp Plant Science l^ncrA 198434 «83194
[7i赵晓明・卞明山宋秀英通ftl织堆养？Biifltfl执早疫綱次变体(J]•山芮农学学JK・199616(4)350 333・
L8J刘iStWlA木•利黑根疫缶培养键績体外弟选胡犠航疽病性麻❻究LJ]•熔带亚熾帶植務爷报・200512(6)328(32
(91彗龙龜•怅悦¥ •吴附东抗甜菜褐班鱗体细啊性系变#研«□]中無料・2001八1・5・ [nj 关风・王裕中利乐谷■刀江苏199415(1)35 39
Stydy on the selection of cell mutant lines resistant to
Phytophthora cap si ci in pepper
QI FeiGONG ZhenghuiHUANG Wei
«Wrfr ft J urni w*rr H & —加秋・Sha*i 7l2IOO>CAnu)
Abstract：In this study we selected some cell mutant lines by using the cotyledons of three pepper cul tivars 2001 *＼2056・2031 as explants induced the callus and (he filtrate of Phytophthora capsid (crude toxin) as the selective agent・ The experimental results showed that the crude toxin of Phytophthora capsici inhibited the inducement • the growth of callusand the differentiation frequency and the growth of buds・ The inhibnion increased with the increase of concentration of crude toxin The experiment also found that different cultivars had different resistance to Phytophthora ca^sici
Key wordspepperPhytophth^ra cafiucicrudc toxin文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
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抗疫病变异体
齐飞巩振辉黄炜
(廉北农林科技学E1艺学安•陕丙畅凌712100)
r« S］选2OO1 2O56J2O313辣戡品沖作试材•子叶作外柚体诱导愈伤姐纨•辣戡疫 狷榴廉藏培养建蔽制取作筛选剂•席选辣壇抗疫病细胸变界系纳果表明•辣檄疫病病煤椒 子叶愈伤组织诱辱生长定芽分化具显着抑制作•抑制作度堆加堆加• 辣椒品种愈伤组织毒素忍耐力
［■关■闻〕疫筋病晾蔚粗毎变异系愈伤组织
［中图分类号］S641303 53 ［文敵标识矶］A ［文韋细号］16719387(2006)02008306
辣械疫病危霑辣椒生产病害 • 世界许国家发生该病害定辣椒疫病病原 菌(Phylophthora capsici)引起种毁灭性土传病 害苗期成株期辣椒均伤害茎叶果实均 发病•传播速度极快常致发病田绝产•造成 严重济损失利化学药剂植株部进行 喷施防治传统方法仅污染产品环境•防 治效果较差采常規育种杂交育种技术进 行辣椒抗疫病育种工作•具脊种周期较长难 短时间获优质抗病品种缺点•寻求 种新效果周期短抗病育种途径•已成辣 掀高产优质抗病育种研究噫点
年植物离体培养篩选细胞突变体技术迅 速发展国外已建立较完善利组织培养 技术•离体筛选抗逆种质新方法植物抗病 抗草剂附盐胁迫抗金属离子棣性育作物 品质改良等方面取喜成•获母突 变体材料⑴诱导成功筛选出辣椒抗疫病 体细胞变异性系国外尚未见报道基• 试验建立完善辣嫩抗疫病体细胞变异性系诱 导筛选体系•基础获抗疫病体细胞 变异株系•加速辣椒抗疫病新品种选育 推广农业持续性发展具虫理实 践意义
1材料方法
1・1材料
选取树20012056203L3辣椒品种 (系)作试材•中品种2001市售种•品系 2056203西北农林科技学园艺学院辣椒 种质资源育种课题组提供3供试材料均辣 拟疫病感病品种(系〉
辣椒疫病病原菌陕西杨凌分离菌株辣 愎愈伤组织诱导分化培养基(MS+质fit分数3 蔗 黯+质罐分数06 琼脂+ 5 0 mgL BA + 0 5 mgL IAA)ffi 1 moIL NaOH 1 moIL HCI 调 pH5・8•0・10〜0・15 MPa压力121〜126 C高温灭菌20 miru愈伤组织诱导定 芽分化
1・2方法
121躱救苗苗获 精选辣椒种子 55 C温水浸泡2 h体积分数70 酒箱稷泡40 质址分数2 次氯酸例溶液消稚30 min菌水漂 洗3〜4次接种MS+质分数3 蔗糖十质敌 分数0・6 琼脂培养基(pH 58)S光 2 000 Lx(14d)白天26 C晚20 C条件发芽 培育成苗
122 嫌椒疫炳病原荫粗奉素制备 辣椒疫病
［ttMR 期］200S0608
［慕金项R］国家白然科学茎金項目(30571262)北农林科枝宁遗传育种专項(O5YZO241) ［ffata介〕齐 飞
〔通讯作右〕巩振矫〈1957—>・男•陕四礼泉•氢厲・博士•博士生特紳•事蔬菜种植贵卑生物技术研究• Enuil igzhhl63@yahoo ・ com cn
滞原 （Phytophthora ca>sici Leonian）^ 进行液体 培养材7 d接种PDA固体培养基进行繁殖 鉴定挑取5块农径8 mm单繭菊落接种100 m•胡妙卜汁培养液中（CFB）g 27 C黑暗条件 110120 rminfis荡培养18d双层灭菌滤 纸滤荫丝体•滤液4 000 rmin离心20 min• 淸液煮沸滤辣椒疫病病原菌粗毒素
1 2 3 媒奴疫病病原苗根*索•檢椒子叶愈伤组 织讲字形旳 分选取3辣椒品种12 d苗龄 幼苗子叶•接种粗秦索体积分数分0 10 20 30 40 50 60 筛选培养 基•毎处理50外植体接种时外植体伤口培 养基表面充分接絶•繭苗生长条件：温度20〜 25 C •光2 000 Lx 14 h光10h 愈伤组织 诱导继代分化培养条件：温度20〜25 C•光 2 000 LxH h光0 h暗20 d分统计试验 材料愈伤组织诱导率发佇状态
1 2 4 辣椒疫病病原苗相#素林椒愈伤组织增 殖影响 分选取3辣椒品种12 d苗龄幼苗 子叶接种分化培养基•毎处理100外植体 接种时外植体伤口培养菇表充分接触•培养条 件123培养20 d愈伤组织外杭体伤口 处切•转接粗裨素体积分数10 筛选培养 基继代筛选堆养•精确度0・001 K天称 議处理材料愈伤组织鲜垂培养20d^・ 选择3品种未褐化生长明显愈伤组织•转接 粗毒素体积分数20 筛选培养基进步 继代筛选培养•梢确度0・001 g天称 材料愈伤组织鳞电・20 d1粗毒寮浓度筛选 周期•食伤纽织筛选粗毒索体积分数高 60 粗毎索筛选周期•观察材料 处理愈伤组织生长状态•称秋愈伤组织鮮 重肿算愈伤组织増殖率计算公式F：
愈伤组织增殖率□（（培养愈伤组织址 转入愈伤组织墮）转入愈伤组织fi）xioo
125 辣椒疫病病原菌祖命素林椒愈伤组织分 化影响 方法124毎粗潅索体积分数 籀选周期•均统计材料冬处理定芽分化 率毎愈伤组织存活率定芽生长状态
126 抗性细胞系筛选稳定性養定 分 3品种粗毒索体积分数60 筛选培养基 生长愈伤组织•转接毒索协迫MS培养基 维代增殖4次•洶汰粗恋素嗜适应细胞 分M200r＼M2056＼2031抗性变异系 系转接粗毒喫体积分数60 筛选培养基 进行培养•研究抗性性系抗巌素性统计 处理愈伤组织存活率愈伤组织增殖率占 127扶性胞系植株生 抗性愈伤组织 分化定芽丛分割•转芽伸长培养基•培养条 件l・2・314d继代I次定芽叶片开展•时 茎伸长定芽长23 cm时•基部 切卜••插入生根培养基中诱导生根•长成发达根 系•移盛菜园土蛭石（质械1二1）肯 养钵中保湿培养
2结果分析
2 1練椒疫病病原茵粗■素猱議子叶敌伤组 诱导形响
山表1岀•辣椒愈伤组织诱导率86希辣 椒疫病病原菌粗毎素浓度升髙降低辣椒疫 病病原帝粗靈素体积分数10 时「2001 20562031愈伤组织诱导率分90 ■ 88 86 粗毒素体积分数60 时・ •2OOLJ2O56愈伤组织诱导率分4 2 ■2031粗诱索体积分数50 时已 愈伤组织产生说明辣椒疫病病原菌粗枣索辣 揪愈伤组织强烈褂害作粗滞素体枳分 数0处理外•粗奉索体积分数相条件• 2001愈伤组织诱导率明显髙M2O31 ＼说明 辣椒品种愈伤组织襌索忍耐力 2001粗奇素忍耐力强广2031弱试验 发现•生长花含粗磁集培养基3辣椒 品种•愈伤组织均出现程度悔化•粗毒 素体枳分数越高•福化现氟越严电
22猱椒疫病病原■粗■素伤组织增殖
表2知辣椒疫病病原菌粗廓素筛选辣 緻愈伤组织时•粗毒索体积分数升奇•愈伤组织 受抑制程度增强粗毒素体积分数10 时广2001貫205603愈伤组织生长状况良 •新鲜均匀疏松•淡绿色•愈伤组织增弟率分 896 88 9 86・2・粗產索体积分数 60 时•仅愈伤组织存活广2001化2056 H2O31w愈伤组织增殖率分1& 7 153 1・6
»1問体积分敷粗•康UMt子叶愈伤組织诵辱影*
Table 1 Effect of crude toxin on inducement of callus of pepper
体积分数 Crude toxin
concfn iraiionH
Variety
外植体敗 No of explancs
魚伤 组妃数 No of callus
金伤组级 携卄 Rate of callus induced
体积分效 Crude foxin
concen* traiionK
品种
Variety
ft ft 外
No of explantn
倉伤
No of callus
金伤组块
Rme of callus tnduerd
200
50
50
100
2001
50
1)
22
0
2056
50
49
98
40
2056
50
7
U
203
50
50
100
2031
50
5
to
2001
50
45
90
2001
50
5
to
10
2056
50
44
88
50
2056
50
3
6
2031
50
43
86
2031
50
I
0
2001
50
34
68
2001
SO
2
4
20
2056
50
30
60
60
2056
50
1
2
2031
50
28
56
2031
50
0
0
200)
50
25
50
30
2056
50
20
40
2031
50
17
34
«2 伤组织增療序*
Table 2 Effect of crude toxin on growth of callus of pepper
伟尉富％ 品种 i盘鵲 ＼ ^SSS SmS 蓟溜『
Crude toxin Variety Rate of growth Growth | Crude toxin Variety Rote of growth Growth
concent ratK>n«
of callun
«tate
concent rn lions
of cxllus
stjiie
2001
965
+ + + + +
200)
345
+ + +
0
2056
943
+ + + + +
40
2056
326
+ + +
2031
93・6
+ + + + +
2031
308
+ +
2001
896
+ + + + +
2001
209
+十
10
2056
889
+ + + + +
50
2056
19 H
+ +
2031
862
+ + + +
2031
5・9
+
2001
696
+ + + +
2001
167
+
20
2056
6& J
+ + + #
60
2056
153
2031
634
+ + +
2031
116
+
2001
502
+ + +
30
2056
48・6
+ +十
2031
409
+ + +
注+ + + +十@伤ffltHUHL赣鲜均匀欣松•湊结色・+ + + +・金伤IU9L负■较•较競勢疏松•黄绿色・+ + +・3愈伤A1CI质債幣
黄色i + 色)+・部分倉伤組伙福化死亡•确•存活
Note 十 + •♦• + + ・ means callus grows well ・ Kght green ■ + + + +・ mc«nx callus grows good ・ yellow・grecn + 4» + • mean 1 3 callus grows in bad condition・ycllovu + + ・mcan» 12 cullu* growjc in bud condition• yellowbrown + ・ mcenmost o( calluR died・
23練議疫詹病原VS««楝椒您伤组织分化 影响
表3知•辣锻疫病病原菌粗孝素显著抑 制辣椒子叶食伤组织分化定芽•君粗毎素体 积分数升高•愈伤组织存活率降低•定芽分化 率显苦降低粗雄素体积分数10 时 200r^2056w2031愈伤组织定芽存活率 分885 85 6 818 •分化率分
842 >82 3 7& 6 •时定芽生长基 正常长势较稍弱毒素体积分数60 时m2001＼m2056h2O3L愈伤组织定芽存活率 分15・8 ・14・5 & 6 •分化率分
«3体积分練複@伤组録分化影購
Table 3 Effect of crude toxin on differentiation of callus of pepper
102 8・1 4・3 •时定芽枯黄甚死 亡粗毒索203L定芽稚宮作强2 品种说明粗侮素辣徵品种定芽具 毒害作结果均表明•辣椒疫病病原菌粗 毒素辣織定芽分化生长强烈冬害作
体枳分败 Crude toxin concern rat ion
A#
VArieiy
化棋 R*ie of di(krcnU8iion of callu5
eftfii 织 定芽存活車 Rite of living callus
长状念
Growth Mute of call
200
95 ＼
1000
分化 Sirong differeniiation
0
2056
943
1000
分化 Strong Afferentialion
2031
905
9&0
分ft
Strong diffrrrntiAtion
2001
842
88・5
分化弱 Weak differrnimiion
10
2056
823
856
分化％ Weak differenlMKion
2031
78・6
Al8
分化 Wenk differeniiation
2001
756
784
停止分化 No differenuaiion
20
2056
731
775
停止分化 No diffcrcntuiion
2031
658
722
停止分化 No diffrrcntialMJn
200
60 4
63 H
雄殊岀现褐化
Basilar lis^ue npf»eared bruising
30
2056
593
612
基部岀
lifl
2031
539
526
B&Mlar (isMue bruised totally
2001
3& 8
S3 7
系部化
tU«ihr lixxuc brui^d tomlly
40
2056
365
295
化
liAxthr tixue bruised family
2031
29 7
239
化
Top of buds bruised toullv
2001
196
236
芽尖鸭化
Top of bod bruiMid lotally
50
2(156
168
212
芽尖甥化
Top of buds bruised totally
2031
114
154
枯貧死亡 Perished end died
2001
102
158
死亡
Pcn»hcd And died
60
2056
8・1
145
枯酋•死亡 Perished »nd died
2031
43
& 6
怙赏•死亡 Peris bed and dxd
24抗性细胞礙S定性分析
抗性细胞系稳定性分析结果见表4表4 知•辣椒抗疫病愈伤组织变异系系含 相体积分数粗磯素培养基培养时•两者存 活率增殖率存明显差异庄体枳分数60 粗毒亲培养基中培养时•抗性愈伤组织定 生长蜀受强抑制•2001・2056 2031抗性愈伤组织存活率分853 ■
838 809 •愈伤组织存活率分 8 9 ■&8 3・8 2001720562031 抗性愈伤组织增殖率分32・8 30・3 251 ■愈伤组织增值率分5・3 ■
48 4・3 结果均表明•粗毒索连续筛 选抗性细胞变异系辣椒疫病病原菌粗旅索 具稳定抗性种抗性否够稳定遗传 抗性细胞系生植株否抗病•需进步研究
证实
*4浹性fan*定性分析
Table 4 An^ly^is of resistibility of cell mutant lines
41* Variety
<伤率Rate of growth of callus
敢伤ttl织存沾車 Rate of living c^lluti of pepper
变# Trentmenl
CK
变异疾Treatment
頸紊CK
2001
328
53
853
& 9
2056
303
48
83・8
68
2031
251
43
809
38
25抗性细胞系植株生
试验获辣椒品种2001抗疫病生植株 15株获辣椒品种2056抗疫病生植株12株 获辣椒品种2031抗疫病生植採8株辣锻 抗疫病生植株抗病性鉴定进步研究
3讨
体细胞性系变异发生植物 器官组织细胞愈伤组织许利组织培养 进行植物育种研究发现•组织培养程中 发生丰富变异•处分化状态愈伤组 织•身体细胞性条变异原组织培 养新非常丰富遗传变异源泉 试验筛选方法足愈伤组织接种选择培养 基未原始材料进行诱变处理植物 病原毒索足病原菌产生奇性代谢产物寄植 物病害发生发展程中起明显致病作研 究3⑷表明•祗素仅植物组织器官毒害作 植物离体培养细胞明显毒害作 毒索作选择剂愈伤组织进行抗性筛选•获 抗性细胞变异系赵晓明等⑺番茄愈伤组织转 接含番茄早疫病粗命素培养基发现•毒索 浓度增加愈伤组织增殖率明显降低•褐化现第加 蛋刘进等⑹报道•辣椒疫離培养滤液胡感茎尖 丛生芽存活生长均右抑制作•滤液浓 度升高•茎尖丛生芽存活率生长率均降• 马龙彪铮⑼报道•甜菜褐斑病培菲滤液愈伤组织 诱导率生苗率均定抑制作研究 发现•辣椒疫病病原繭粗矗素辣椒愈伤组织 诱导增殖明显抑制作抑制作粗牡 素体积分数增加增强山见病原菌粗毎素 离体细胞确毎害作
抗崭育种中利毒索进行抗性籀选时关 憊问题确定毎素浓度处理方法果毒 索浓度高•材料死亡率•选择时易导致抗 性材料丢失（果浓度低•选择压力易选 出髙抗材料赵晓明等⑺报道•早疫病粗毒素筛选 番茄抗早疫病突变体时30 毒索浓度佳筛选 浓度刘进等⑴辣椒疫需培养滤液体外筛选 胡械抗瘟病性系时•选择粗毒索浓度50 作 选择剂压力限筛选出抗瘟病胡椒生植株吴 志凤等⑷认•组织培养中选择存活率5 时 毒亲浓度较合适试验辣椒疫病粗毒索 愈伤组织毒害作基础•结合辣锻疫病粗侮素 生物活性测定•综合评定认•粗帝素合适筛选诙 度体积分数60
筛选程中愈伤组织存活率会筛选 次数增加秦索浓度增加减少期 获较存活愈伤组织生植株•试脸接种 址外植体■定程度增加试验成 试验中•存活愈伤组织少悄况•进步 鉴定抗病性•存活愈伤组织切取部分愈伤 组织扩繁殖•取良效果
外筛选出抗性愈伤组织进行抗性稳定 性鉴定非箴必婴方面定选 择压力部分连续筛选次愈伤组织细胞仅 仅生理适应细胞•非遗传变异细胞•转入 正常培养基培养数代抗性会消失 外愈伤组织通常复杂细胞类型外植体诱 导产生初始生理遗传具致性愈伤 组织部生理特性细胞邻细胞缓 •逃脱选择压：方面部敏感细 胞抗性细胞包围•体外选择中存活 产生具抗性柏［株•敏感细胞 抗性细胞间通胞间连丝传递某联具抗性作 化合物表型聆敲作增加体外选择复杂 性然定程度通连续转接克服峽 点•愈伤组织进行抗性稳定性鉴定•助进 步确定筛选愈伤组织抗性细胞系・研 究筛选抗辣椒疫病细胞变异系海素培 养基继代4次•转接含体积分数60 粗於 素筛选培养墓发现•抗性愈伤组织定 生长•生长完全受抑制•说明粗 扇素连续筛选抗性细胞系辣椒疫病病原菌 粗福索具稔定抗性
总•利植物体细胞突变系进行抗性育种•缩 短仃种年限•广泛获具种优艮性状 突变系：F1前体细胞突变体筛选利方面•国 外已展开广泛研究•批具优良性状 品种（系〉应杂交育种生产中着细胞 工稈研究深入•利组织培养方法诱发变异•筛 选突变体•理实践具广阔師晟 深远意义°
[參考文敝]
[IJ刘进卩•迎木•体外性系变庄抗統仃井中aft200224(5)617^30
[2] Bchnk< Selecuon of potato callu* for rrj
[5] Hartmnn (＼|・ Ukc* of alfnlU (mikv I > cell ruhurc to produce* ptnntic rcxi^iAni to FuMrium wih enuwed by Faianum 戶卜 f *p rwrcf
[6 ＇ HnrlniAn C JMe Coy T J・Knou^ T R・ Selrclson of dhdhi (Mfdicu^ wjuj) cell line* ajxl rq^rnrrniion of phniA wjum 10 the toxim <*)prodiHed by k＇u^ifiaw ruy^rtm ( sp Plant Science l^ncrA 198434 «83194
[7i赵晓明・卞明山宋秀英通ftl织堆养？Biifltfl执早疫綱次变体(J]•山芮农学学JK・199616(4)350 333・
L8J刘iStWlA木•利黑根疫缶培养键績体外弟选胡犠航疽病性麻❻究LJ]•熔带亚熾帶植務爷报・200512(6)328(32
(91彗龙龜•怅悦¥ •吴附东抗甜菜褐班鱗体细啊性系变#研«□]中無料・2001八1・5・ [nj 关风・王裕中利乐谷■刀江苏199415(1)35 39
Stydy on the selection of cell mutant lines resistant to
Phytophthora cap si ci in pepper
QI FeiGONG ZhenghuiHUANG Wei
«Wrfr ft J urni w*rr H & —加秋・Sha*i 7l2IOO>CAnu)
Abstract：In this study we selected some cell mutant lines by using the cotyledons of three pepper cul tivars 2001 *＼2056・2031 as explants induced the callus and (he filtrate of Phytophthora capsid (crude toxin) as the selective agent・ The experimental results showed that the crude toxin of Phytophthora capsici inhibited the inducement • the growth of callusand the differentiation frequency and the growth of buds・ The inhibnion increased with the increase of concentration of crude toxin The experiment also found that different cultivars had different resistance to Phytophthora ca^sici
Key wordspepperPhytophth^ra cafiucicrudc toxin
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