**农业学农学院
科毕业文开题报告
说 明
1．文开题报告保证毕业文质量重环节规范毕业文开题报告特印发表
2．学生应2005 年3 月20 日前通调研资料搜集动指导教师讨指导教师指导完成开题报告班级单位报系
3．表填写式三份份交院教学秘书留存（含电子版）份交指导教师份学生存
4．开题报告需教研室文指导组讨院毕业实领导组审查方正式进入文写作状态
1．选题意义研究现状
1．选题原理意义现实意义
杂种优势利蔬菜育种手段蔬菜育种实践中具重位目前生产实践中推广应蔬菜作物种类品种基代杂种着代杂种种植面积断扩品种种子真实性问题显十分重种子重农业生产资料农业增产诸素中具代作种子质量优劣程度直接影响农业生产农产品质量种子纯度保证优良品种增产潜力发挥关键素生产实践中常常出现种子纯度高活力降造成产量降低品质变劣严重影响济效益品种真实度检验保证种子质量提高农业生产效益具重作
着种植结构调整居民消费水提高马铃薯已成中国第四作物脱毒种薯逐渐开始普种薯生产销售流通数量逐年增优良品种作物高产基础品种混杂会明显降低产量影响产品质量商品价值快速准确鉴定品种进行纯度分析种子质量标准化品种审定假种辩产权纠纷等具重作
传统品种鉴定通常采形态学标记方法鉴定周期会长会存较误差性状差异较品种间鉴定困难DNA分子标记技术反映出品种遗传质差异品种鉴定时具周期短点会受环境条件影响利套机引物量DNA分子标记助计算机进行系统分析研究尝试采CTAB法提取马铃薯基组DNA试验研究应RAPD分子标记技术**薯3号商品种进行鉴定送检样品中杂种成功区分出证明DNA分子标记辅助选择技术马铃薯育种研究中具重应价值
2．选题相关研究现状分析
(1)进行品种鉴定系谱分析
品种分类鉴定常形态工酶区某关系较材料准确区分RAPD分类鉴定表现出明显优势
(2) 基定位
RAPD容易检测DNA态性通RAPD标记进行基定位
(3)易位系鉴定
利染色体易位外源益基引栽培种作物改良重途径关键易位系鉴定
(4)构建遗传图谱
RAPD物种态性检测遗传图谱构建．品种分类亲缘关系鉴定病毒检测．优良性状抗性筛选理想方法预见21世纪生物科学时代生物技术广泛应历史发展必然趋势 RAPD标记技术遗传学理实践研究中起越越重作
二研究方案
1．拟采研究方法
121 DNA提取
（1）取马铃薯块茎幼芽加液氮研磨成粉末状迅速移入15 ml Eppendorf中
（2）加入800 μlCTAB提取缓液混匀（CTAB65℃水浴预热）5min轻轻震荡次20min12000 rmin离心15 min
（3）心吸取清液加入等体积酚：氯仿（400μl）溶液混匀4℃12000 rmin 离心10 min
（4）心吸取清液加入等体积氯仿混匀4℃12000 rmin离心10 min
（5）重复步骤（4）12次蛋白层出现止
（6）取清20℃沉淀1h4℃12000 rmin离心10 min
（7）弃清液70乙醇洗涤沉淀2次
（8）室温干燥10min溶3050 μl DEPC离子水中20℃者70℃保存备
122 PCR扩增
PCR反应体系：
Template（20 ngμ1）
10×PCR buffer
25mM Mg2+
Primer (20μM)
25mMdNTP
Taq DNA Polymerase（5Uμ1）
ddH2O
Total
PCR扩增程序进行：
Stepl 94℃(预变性)
Step2 94℃(变性)
Step3 36℃(退火)
Step4 72℃ (延伸)
Step5 GOTO Step2 more 40 times
Step6 72℃(延伸)
Step8 4℃
Step9 end
干循环循环72 oC增加10min循环结束反应物置4 oC保存
123脂糖凝胶电泳检测
1称取1g琼脂糖放锥形瓶中量取50ml05×TBE溶液混合放微波炉中煮沸溶液清彻透明止约需1分40秒
2冷60℃时（放掌心感觉烫忍受）加2μl核酸染料EB然摇匀
3组装制胶器调水胶倒制胶器中插梳子40分钟胶冷凝固放倒电泳缓液电泳槽中进行点样
4取510μl样品溶液加12μl 6×loading Dye混合均匀进行点样排点样孔点5μlMarker
5点完调电泳仪参数进行电泳：U：80VA200AT：40min
6电泳结束心取出凝胶置紫外灯观察DNA存显示出红色荧光条带采凝胶成系统拍保存
注意：核酸燃料EB剧毒琼脂糖凝胶电泳检测全程应带防护手套进行保护
三研究计划参考文献
1．研究计划安排
2011年12月2012年2月 文献资料查阅实验方案设计
2012年3月 开题报告撰写
2012年3月10月 马铃薯品种收集指标测定
2012年10月2013年4月 数整理毕业实文撰写
2013年5月 文答辩
2．参考文献（少10条）
[1]张菊张兴志王元分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度研究进展[J]河南科技学学报20031
[2] 司怀军王蒂张宁等马铃薯中国社会义新农村建设中作[C]2008年马铃薯年会会议文集20081316
[3]王绍鹏邱彩玲李勇宿飞飞刘尚武吕典秋[A]马铃薯DNA提取SSR标记分析20095
[4] 张东晓糠谷明RAPD分析应厚甜瓜干品种品系间较福建农林学学报[J]20004
[5] 余守武刘宜柏微卫星标记水稻遗传育种中应[J]江西农业学学报200325(2)157163
[6]陈绪清柳俊郑琏谢华马铃薯RAPD标记PCR技术影响素探讨[J]1999
[7]蒋先明田玉丰赵越等马铃薯改良科学基础[M]北京中国农业出版社1984
[8]辛业芸分子标记技术植物学研究中应[A]20024
[9]王元李坚殷秋秒邓义DNA分子标记鉴定蔬菜种子纯度原理分析[J]湖北农学院学报199913
[10]李先云昆李树莲等云南马铃薯栽培品种RAPD研究[A]·见陈伊里·中国马铃薯研究进展[C]·****工程学出版社1999
指导教师意见
指导教师签名： 日期：
毕业实指导组意见
负责签名：
院毕业实领导组意见
负责签名： 日期：
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说 明
1．文开题报告保证毕业文质量重环节规范毕业文开题报告特印发表
2．学生应2005 年3 月20 日前通调研资料搜集动指导教师讨指导教师指导完成开题报告班级单位报系
3．表填写式三份份交院教学秘书留存（含电子版）份交指导教师份学生存
4．开题报告需教研室文指导组讨院毕业实领导组审查方正式进入文写作状态
1．选题意义研究现状
1．选题原理意义现实意义
杂种优势利蔬菜育种手段蔬菜育种实践中具重位目前生产实践中推广应蔬菜作物种类品种基代杂种着代杂种种植面积断扩品种种子真实性问题显十分重种子重农业生产资料农业增产诸素中具代作种子质量优劣程度直接影响农业生产农产品质量种子纯度保证优良品种增产潜力发挥关键素生产实践中常常出现种子纯度高活力降造成产量降低品质变劣严重影响济效益品种真实度检验保证种子质量提高农业生产效益具重作
着种植结构调整居民消费水提高马铃薯已成中国第四作物脱毒种薯逐渐开始普种薯生产销售流通数量逐年增优良品种作物高产基础品种混杂会明显降低产量影响产品质量商品价值快速准确鉴定品种进行纯度分析种子质量标准化品种审定假种辩产权纠纷等具重作
传统品种鉴定通常采形态学标记方法鉴定周期会长会存较误差性状差异较品种间鉴定困难DNA分子标记技术反映出品种遗传质差异品种鉴定时具周期短点会受环境条件影响利套机引物量DNA分子标记助计算机进行系统分析研究尝试采CTAB法提取马铃薯基组DNA试验研究应RAPD分子标记技术**薯3号商品种进行鉴定送检样品中杂种成功区分出证明DNA分子标记辅助选择技术马铃薯育种研究中具重应价值
2．选题相关研究现状分析
(1)进行品种鉴定系谱分析
品种分类鉴定常形态工酶区某关系较材料准确区分RAPD分类鉴定表现出明显优势
(2) 基定位
RAPD容易检测DNA态性通RAPD标记进行基定位
(3)易位系鉴定
利染色体易位外源益基引栽培种作物改良重途径关键易位系鉴定
(4)构建遗传图谱
RAPD物种态性检测遗传图谱构建．品种分类亲缘关系鉴定病毒检测．优良性状抗性筛选理想方法预见21世纪生物科学时代生物技术广泛应历史发展必然趋势 RAPD标记技术遗传学理实践研究中起越越重作
二研究方案
1．拟采研究方法
121 DNA提取
（1）取马铃薯块茎幼芽加液氮研磨成粉末状迅速移入15 ml Eppendorf中
（2）加入800 μlCTAB提取缓液混匀（CTAB65℃水浴预热）5min轻轻震荡次20min12000 rmin离心15 min
（3）心吸取清液加入等体积酚：氯仿（400μl）溶液混匀4℃12000 rmin 离心10 min
（4）心吸取清液加入等体积氯仿混匀4℃12000 rmin离心10 min
（5）重复步骤（4）12次蛋白层出现止
（6）取清20℃沉淀1h4℃12000 rmin离心10 min
（7）弃清液70乙醇洗涤沉淀2次
（8）室温干燥10min溶3050 μl DEPC离子水中20℃者70℃保存备
122 PCR扩增
PCR反应体系：
Template（20 ngμ1）
10×PCR buffer
25mM Mg2+
Primer (20μM)
25mMdNTP
Taq DNA Polymerase（5Uμ1）
ddH2O
Total
PCR扩增程序进行：
Stepl 94℃(预变性)
Step2 94℃(变性)
Step3 36℃(退火)
Step4 72℃ (延伸)
Step5 GOTO Step2 more 40 times
Step6 72℃(延伸)
Step8 4℃
Step9 end
干循环循环72 oC增加10min循环结束反应物置4 oC保存
123脂糖凝胶电泳检测
1称取1g琼脂糖放锥形瓶中量取50ml05×TBE溶液混合放微波炉中煮沸溶液清彻透明止约需1分40秒
2冷60℃时（放掌心感觉烫忍受）加2μl核酸染料EB然摇匀
3组装制胶器调水胶倒制胶器中插梳子40分钟胶冷凝固放倒电泳缓液电泳槽中进行点样
4取510μl样品溶液加12μl 6×loading Dye混合均匀进行点样排点样孔点5μlMarker
5点完调电泳仪参数进行电泳：U：80VA200AT：40min
6电泳结束心取出凝胶置紫外灯观察DNA存显示出红色荧光条带采凝胶成系统拍保存
注意：核酸燃料EB剧毒琼脂糖凝胶电泳检测全程应带防护手套进行保护
三研究计划参考文献
1．研究计划安排
2011年12月2012年2月 文献资料查阅实验方案设计
2012年3月 开题报告撰写
2012年3月10月 马铃薯品种收集指标测定
2012年10月2013年4月 数整理毕业实文撰写
2013年5月 文答辩
2．参考文献（少10条）
[1]张菊张兴志王元分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度研究进展[J]河南科技学学报20031
[2] 司怀军王蒂张宁等马铃薯中国社会义新农村建设中作[C]2008年马铃薯年会会议文集20081316
[3]王绍鹏邱彩玲李勇宿飞飞刘尚武吕典秋[A]马铃薯DNA提取SSR标记分析20095
[4] 张东晓糠谷明RAPD分析应厚甜瓜干品种品系间较福建农林学学报[J]20004
[5] 余守武刘宜柏微卫星标记水稻遗传育种中应[J]江西农业学学报200325(2)157163
[6]陈绪清柳俊郑琏谢华马铃薯RAPD标记PCR技术影响素探讨[J]1999
[7]蒋先明田玉丰赵越等马铃薯改良科学基础[M]北京中国农业出版社1984
[8]辛业芸分子标记技术植物学研究中应[A]20024
[9]王元李坚殷秋秒邓义DNA分子标记鉴定蔬菜种子纯度原理分析[J]湖北农学院学报199913
[10]李先云昆李树莲等云南马铃薯栽培品种RAPD研究[A]·见陈伊里·中国马铃薯研究进展[C]·****工程学出版社1999
指导教师意见
指导教师签名： 日期：
毕业实指导组意见
负责签名：
院毕业实领导组意见
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