水产品水中丁香酚类化合物测定
BJS 201908
1 范围
方法规定水产品水中丁香酚类化合物气相色谱质谱测定方法
方法适淡水虾淡水鱼海水虾海水鱼等水产品水中丁香酚类化合物测定
2 原理
乙腈提取试样中丁香酚类化合物乙腈饱正烷脂净化滤净化（水样）采气相色谱质谱联仪检测外标峰面积法定量
3 试剂材料
非规定外方法试剂均分析纯水符合GBT 6682规定级水
31 试剂材料
311乙腈（CH3CN)：色谱纯
312正烷（C6H14）：色谱纯
313 水硫酸钠（Na2SO4）
314 水硫酸镁（MgSO4）
315 二甲亚砜（C2H6OS英文缩写：DMSO）
316 乙腈饱正烷溶液：量取200 mL正烷（312）250mL分液漏斗中加入适量乙腈（311）剧烈振摇数分钟静置分层弃层乙腈
317 陶瓷均质子：50mL tubes
32 丁香酚类化合物标准品：6种标准品中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见表1纯度均≥95
表1 丁香酚类化合物标准品中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
1
丁香酚
Eugenol
97530
C10H12O2
16420
2
甲基丁香酚
Methyleugenol
93152
C11H14O2
17823
3
异丁香酚
Isoeugenol
97541
C10H12O2
16420
4
式甲基异丁香酚
Methyl Isoeugenol
93163
C11H14O2
17823
5
乙酸丁香酚酯
Eugenyl Acetate
93287
C12H14O3
20624
6
乙酰基异丁香酚
Acetyl Isoeugenol
93298
C12H14O3
20624
33 标准溶液配制
331丁香酚类化合物标准储备溶液：分准确称取6种丁香酚类化合物标准品（32）1000 mg（精确0000 1 g）乙腈溶解定容100 mL溶液浓度均1 mgmL4℃避光密封保存效期3月
332丁香酚类化合物标准中间溶液：6种丁香酚类化合物标准储备溶液（331）乙腈稀释成10 µgmL混合标准中间溶液4℃避光密封保存效期1月
333空白基质溶液：称取空白试样51规定样品预处理方法操作制备
334 标准系列工作溶液：空白基质溶液（333）标准中间溶液（332）稀释成终浓度40 ngmL100 ngmL200 ngmL500 ngmL1000 ngmL标准系列工作溶液时配制
4 仪器设备
41气相色谱质谱联仪：配电子轰击电离源（EI）
42 涡旋振荡器
43 超声波清洗器
44 台式均质仪
45 分析天：感量分01 mg001 g
46 离心机：转速≥5000 rmin
47 聚丙烯离心：15 mL50 mL
48 移液器：200 µL10 mL
5 分析步骤
51 试样制备保存
淡水鱼淡水虾海水鱼海水虾：取样先鱼体虾体表面杂质洗净鱼鳞皮取肌肉部分虾壳头取食部分试样均质混匀18 ℃冷冻保存备
水样：取样充分混匀18 ℃冷冻保存备
52 试样前处理
521 水产品(淡水鱼淡水虾海水鱼海水虾)
取试样常温然解冻称取20 g试样（精确001g）50 mL离心中加入5 g水硫酸钠适搅拌混匀加入颗陶瓷均质子10 mL 乙腈涡旋混匀1 min超声提取15 min5000 rmin离心5 min清液转50 mL离心中残渣中加入10 mL乙腈重复提取次合清液加入5 mL乙腈饱正烷涡旋振荡1 min5000 rmin离心5 min弃正烷层乙腈层加入50 μLDMSO40
℃氮吹干乙腈定容1 mL混匀045 μm微孔滤膜供气相色谱质谱联仪分析
522 水样
取水样常温然解冻称取50 g试样（精确0 01 g）50 mL 离心中加入10 mL乙腈涡旋振荡5 min加入50 g 水MgSO4颗陶瓷均质子涡旋振荡5 min5000r min 离心5 min准确移取清液4 mL加入50 μLDMSO40 ℃氮吹干乙腈定容1 mL混匀045 μm微孔滤膜供气相色谱质谱联仪分析
53 仪器参考条件
531气相色谱参考条件
a) 色谱柱：DB1701 300 m×025 mm×025 μm性相者
b) 升温程序：初始温度100 ℃保持1 min6 ℃min升温200 ℃25 ℃min升温260 ℃保持5 min
c) 进样口温度：230 ℃
d) 载气：氦气纯度³99999流速10 mLmin
e）进样方式分流进样
f) 进样量：1 μL
532 质谱参考条件
a) 电离方式：电子轰击电离源(EI)
b) 电离量：70eV
c) 传输线温度：280 ℃
d) 离子源温度：230 ℃
e) 溶剂延迟时间：600 min
f) 测定方式：选择离子监控(SIM)化合物定量定性离子见表2
表2 6种丁香酚类化合物参考保留时间定性定量离子
名称
保留时间（min）
定量离子(mz)
定性离子1
(mz)
定性离子2
(mz)
定性离子3
(mz)
丁香酚
1056
164
149
131
103
甲基丁香酚
1097
178
163
147
103
异丁香酚
1265
164
149
131
103
式甲基异丁香酚
1304
178
163
107
91
乙酸丁香酚酯
1408
164
149
206
131
乙酰基异丁香酚
1592
164
149
206
131
54 定性确证
53仪器条件试样测液标准工作溶液目标化合物相保留时间处(变化范围±05)出现应质谱碎片离子质荷标准工作溶液质谱图致丰度标准工作溶液相应符合表3定性目标化合物6种丁香酚类化合物总离子流图见附录A
表3 气相色谱质谱定性确证相离子丰度容许误差
相离子丰度（）
k>50
50≥k>20
20≥k>10
k≤10
允许相偏差（）
±10
±15
±20
±50
55定量测定
551 标准曲线制作
6种丁香酚类化合物标准系列工作溶液（334）仪器参考条件（53）进行测定相应标准系列工作溶液定量离子色谱峰面积标准系列工作溶液质量浓度横坐标定量离子色谱峰峰面积坐标绘制标准曲线
552 试样溶液测定
试样溶液（51）仪器参考条件（53）进行测定相应试样溶液质量色谱峰面积根标准曲线试样溶液中丁香酚类化合物浓度试样溶液中测物响应值均应仪器测定线性范围试样溶液中测物浓度超出标准曲线范围时应样品溶液作相应稀释进行测定
6 结果计算
试样中种丁香酚类化合物含量式（1）计算：
…………………………………………（1）
式中：
Xi—试样中丁香酚类化合物含量单位毫克千克（mgkg）
c—标准曲线查出试样溶液中丁香酚类化合物质量浓度单位纳克毫升（ngmL）
V—试样溶液定容体积单位毫升（mL）
m—试样质量单位克（g）
f— 稀释倍数
计算结果重复性条件获两次独立测定结果算术均值表示结果保留两位效数字
7 方法精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算数均值20
8 方法准确度
方法淡水虾海水虾淡水鱼海水鱼水中6种丁香酚类化合物加标浓度002 mgkg～010 mgkg时回收率60～120间
9 方法检出限定量限
淡水虾海水虾淡水鱼海水鱼取样量20 g水取样量50 g定容体积1 mL时方法中6种丁香酚类化合物检出限均001 mgkg定量限均002 mgkg
附录A
丁香酚类化合物色谱质谱图
图A1 6种丁香酚类化合物气质联总离子流图
方法负责起草单位：四川省食品药品检验检测院宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心
验证单位：海市食品药品检验陕西省食品药品监督检验研究院广东省食品检验广东省药品检验湛江市食品药品检验
起草：余晓琴方科益邵曼陈树兵高思瑜
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BJS 201908
1 范围
方法规定水产品水中丁香酚类化合物气相色谱质谱测定方法
方法适淡水虾淡水鱼海水虾海水鱼等水产品水中丁香酚类化合物测定
2 原理
乙腈提取试样中丁香酚类化合物乙腈饱正烷脂净化滤净化（水样）采气相色谱质谱联仪检测外标峰面积法定量
3 试剂材料
非规定外方法试剂均分析纯水符合GBT 6682规定级水
31 试剂材料
311乙腈（CH3CN)：色谱纯
312正烷（C6H14）：色谱纯
313 水硫酸钠（Na2SO4）
314 水硫酸镁（MgSO4）
315 二甲亚砜（C2H6OS英文缩写：DMSO）
316 乙腈饱正烷溶液：量取200 mL正烷（312）250mL分液漏斗中加入适量乙腈（311）剧烈振摇数分钟静置分层弃层乙腈
317 陶瓷均质子：50mL tubes
32 丁香酚类化合物标准品：6种标准品中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见表1纯度均≥95
表1 丁香酚类化合物标准品中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
1
丁香酚
Eugenol
97530
C10H12O2
16420
2
甲基丁香酚
Methyleugenol
93152
C11H14O2
17823
3
异丁香酚
Isoeugenol
97541
C10H12O2
16420
4
式甲基异丁香酚
Methyl Isoeugenol
93163
C11H14O2
17823
5
乙酸丁香酚酯
Eugenyl Acetate
93287
C12H14O3
20624
6
乙酰基异丁香酚
Acetyl Isoeugenol
93298
C12H14O3
20624
33 标准溶液配制
331丁香酚类化合物标准储备溶液：分准确称取6种丁香酚类化合物标准品（32）1000 mg（精确0000 1 g）乙腈溶解定容100 mL溶液浓度均1 mgmL4℃避光密封保存效期3月
332丁香酚类化合物标准中间溶液：6种丁香酚类化合物标准储备溶液（331）乙腈稀释成10 µgmL混合标准中间溶液4℃避光密封保存效期1月
333空白基质溶液：称取空白试样51规定样品预处理方法操作制备
334 标准系列工作溶液：空白基质溶液（333）标准中间溶液（332）稀释成终浓度40 ngmL100 ngmL200 ngmL500 ngmL1000 ngmL标准系列工作溶液时配制
4 仪器设备
41气相色谱质谱联仪：配电子轰击电离源（EI）
42 涡旋振荡器
43 超声波清洗器
44 台式均质仪
45 分析天：感量分01 mg001 g
46 离心机：转速≥5000 rmin
47 聚丙烯离心：15 mL50 mL
48 移液器：200 µL10 mL
5 分析步骤
51 试样制备保存
淡水鱼淡水虾海水鱼海水虾：取样先鱼体虾体表面杂质洗净鱼鳞皮取肌肉部分虾壳头取食部分试样均质混匀18 ℃冷冻保存备
水样：取样充分混匀18 ℃冷冻保存备
52 试样前处理
521 水产品(淡水鱼淡水虾海水鱼海水虾)
取试样常温然解冻称取20 g试样（精确001g）50 mL离心中加入5 g水硫酸钠适搅拌混匀加入颗陶瓷均质子10 mL 乙腈涡旋混匀1 min超声提取15 min5000 rmin离心5 min清液转50 mL离心中残渣中加入10 mL乙腈重复提取次合清液加入5 mL乙腈饱正烷涡旋振荡1 min5000 rmin离心5 min弃正烷层乙腈层加入50 μLDMSO40
℃氮吹干乙腈定容1 mL混匀045 μm微孔滤膜供气相色谱质谱联仪分析
522 水样
取水样常温然解冻称取50 g试样（精确0 01 g）50 mL 离心中加入10 mL乙腈涡旋振荡5 min加入50 g 水MgSO4颗陶瓷均质子涡旋振荡5 min5000r min 离心5 min准确移取清液4 mL加入50 μLDMSO40 ℃氮吹干乙腈定容1 mL混匀045 μm微孔滤膜供气相色谱质谱联仪分析
53 仪器参考条件
531气相色谱参考条件
a) 色谱柱：DB1701 300 m×025 mm×025 μm性相者
b) 升温程序：初始温度100 ℃保持1 min6 ℃min升温200 ℃25 ℃min升温260 ℃保持5 min
c) 进样口温度：230 ℃
d) 载气：氦气纯度³99999流速10 mLmin
e）进样方式分流进样
f) 进样量：1 μL
532 质谱参考条件
a) 电离方式：电子轰击电离源(EI)
b) 电离量：70eV
c) 传输线温度：280 ℃
d) 离子源温度：230 ℃
e) 溶剂延迟时间：600 min
f) 测定方式：选择离子监控(SIM)化合物定量定性离子见表2
表2 6种丁香酚类化合物参考保留时间定性定量离子
名称
保留时间（min）
定量离子(mz)
定性离子1
(mz)
定性离子2
(mz)
定性离子3
(mz)
丁香酚
1056
164
149
131
103
甲基丁香酚
1097
178
163
147
103
异丁香酚
1265
164
149
131
103
式甲基异丁香酚
1304
178
163
107
91
乙酸丁香酚酯
1408
164
149
206
131
乙酰基异丁香酚
1592
164
149
206
131
54 定性确证
53仪器条件试样测液标准工作溶液目标化合物相保留时间处(变化范围±05)出现应质谱碎片离子质荷标准工作溶液质谱图致丰度标准工作溶液相应符合表3定性目标化合物6种丁香酚类化合物总离子流图见附录A
表3 气相色谱质谱定性确证相离子丰度容许误差
相离子丰度（）
k>50
50≥k>20
20≥k>10
k≤10
允许相偏差（）
±10
±15
±20
±50
55定量测定
551 标准曲线制作
6种丁香酚类化合物标准系列工作溶液（334）仪器参考条件（53）进行测定相应标准系列工作溶液定量离子色谱峰面积标准系列工作溶液质量浓度横坐标定量离子色谱峰峰面积坐标绘制标准曲线
552 试样溶液测定
试样溶液（51）仪器参考条件（53）进行测定相应试样溶液质量色谱峰面积根标准曲线试样溶液中丁香酚类化合物浓度试样溶液中测物响应值均应仪器测定线性范围试样溶液中测物浓度超出标准曲线范围时应样品溶液作相应稀释进行测定
6 结果计算
试样中种丁香酚类化合物含量式（1）计算：
…………………………………………（1）
式中：
Xi—试样中丁香酚类化合物含量单位毫克千克（mgkg）
c—标准曲线查出试样溶液中丁香酚类化合物质量浓度单位纳克毫升（ngmL）
V—试样溶液定容体积单位毫升（mL）
m—试样质量单位克（g）
f— 稀释倍数
计算结果重复性条件获两次独立测定结果算术均值表示结果保留两位效数字
7 方法精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算数均值20
8 方法准确度
方法淡水虾海水虾淡水鱼海水鱼水中6种丁香酚类化合物加标浓度002 mgkg～010 mgkg时回收率60～120间
9 方法检出限定量限
淡水虾海水虾淡水鱼海水鱼取样量20 g水取样量50 g定容体积1 mL时方法中6种丁香酚类化合物检出限均001 mgkg定量限均002 mgkg
附录A
丁香酚类化合物色谱质谱图
图A1 6种丁香酚类化合物气质联总离子流图
方法负责起草单位：四川省食品药品检验检测院宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心
验证单位：海市食品药品检验陕西省食品药品监督检验研究院广东省食品检验广东省药品检验湛江市食品药品检验
起草：余晓琴方科益邵曼陈树兵高思瑜
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