中药分析整理重点
第章 绪
1 中药分析学定义：中药分析（Analysis Science of Chinese Materia Medica）利物理化学物理化学生物学药理学生物化学相关方法技术研究分析中药（天然药物）中药制剂关联产品质量门科学称天然药物分析（Analysis of Natural Medicinal Products or Analysis of Crude Drugs）生药分析（Pharmacognostical Analysis）
2 定量分析常强调分析中药效成分通常具生物活性医疗作化学成分者称效成分成分生物碱类黄酮苷类蒽苷类强心苷类皂苷类挥发油类香豆素类鞣质类糖氨基酸等中药中生物活性显著成分者称辅成分树脂色素机盐等种区分相外谓效完全代表中药疗效
3 生产线分析 中药制剂生产全程环节（原料药材检测原药材切制粉碎炮制提取滤浓缩制剂中间体制备辅料质量成型工艺程终制剂成品）质量监测时反馈质量信息指导生产发现问题时解决确保产品质量种生产环节中进行适时检测称生产线分析已逐步受厂家药品质量理部门重视
4 GAP（中药材生产质量理规范Good Agricultural Practice）
GLP（药品非床研究质量理规范Good Laboratory Practice
for Nonclinical Laboratory Studies）
GMP（药品生产质量理规范Good Manufacturing Practice for Drugs）
5 研究目标务
A着重强调中药制剂中含效成分化学成分研究
B着重强调定量分析研究
C着重强调现代分析方法应
D着重强调学科手段中药综合分析研究
6 中国药典国家保证药品质量制订法典药品生产营检验监督理部门遵循法定国医药行业外贸易技术交流缺少准绳1953年起出版9版药典
7．取样
药材取样法：取样基原理应均匀合理采四等分法反复数次直剩余量足够试验止均样品量均样品量般少实验需3倍1／3供实验分析13供复核13留样保存保存期少年
8 供试品提取
（1）溶剂提取法
中药中化学成分溶剂中溶解度溶剂性质关般遵循相似相溶原通测成分结构分析选合适溶剂
常提取溶剂
（a）极性溶剂：水典型极性溶剂溶解离子型成分生物碱盐机酸盐成分
（b）非极性溶剂：石油醚乙醚氯仿乙酸乙酯等常非极性溶剂提取低极性成分
（c）中等极性溶剂：乙醇甲醇丙酮等常中等极性溶剂中药类成分具较广泛溶解性
乙醇常提取溶剂
（2）常提取方法
A 冷浸法：浸泡时间12~24（~48）h浸泡期间应注意常振摇浸泡称重冷浸法优点适宜遇热稳定效成分操作简便应较广
B 连续回流法：样品置索氏提取器中利遇热挥发溶剂进行反复回流提取法提取效率高需溶剂少遇热易破坏欲测定成分宜法
C超声波提取法：样品置适宜容器加入提取溶剂置超声波振荡器中进行提取法提取效率高实验证明般样品30min完成
外测成分提取完全中药材粉碎度定求提取方法时间温度等选择通实验数加确定
9含量测定
（1）效成分含量测定
效成分明确中药中成药应进行效成分含量测定确保质量
（2）效部位含量测定
某中药中成药致明确活性物质类成分进行效部位测定总生物碱总皂苷总黄酮等测定效部位总量
（3）效成分明确中药中成药测定
A选择认效成分成分（指示性成分）进行测定
B测定药物总固体量水浸出物量醇浸出物量乙醚浸出物量间接控制质量
C加工炮制制备贮藏程中易损失破坏成分进行含量限量检查
D选适生物效价生物化学方法控制质量
(4)贵重药材含剧毒成分中药测定
A中药制剂中含剧毒成分需测定含量乌头斑蝥等
B贵重药材制剂中投料量应加测定参麝香等
第三章 光谱分析法应
1 200~400 nm 紫外区 400~800 nm 见光区
2 光谱分析法定义分类
利种化学物质（包括原子基团分子高分子化合物）具发射吸收散射光谱系特征确定性质结构含量方法称光谱分析法根光谱谱系特征光谱分析方法分发射光谱分析吸收光谱分析散射光谱分析三类
（1）应吸收光谱原理进行分析：见紫外分光光度法红外分光光度法原子吸收分光光度法
（2）应发射光谱原理进行分析：荧光分析法火焰光度法
（3）应散射光谱原理进行分析：浊法包括免疫浊法等
紫外分光光度法
3 实例1双波长光谱法测定喉痛消盐丸中靛蓝靛玉红含量
青黛该丸剂中药物青黛中效成分靛蓝靛玉红丸剂中含量作喉痛消炎丸质量标准重指标利等吸收波长法进行含量测定样品需预先分离直接测定
A 选择等吸收波长：
图知靛蓝540nm6344nm处合适等吸收波长靛玉红5142nm566nm处等吸收波长空白样品述波长处吸收曲线成条直线干扰测定选靛蓝测定波长λS1566nm参波长λR15142nm选靛玉红测定波长λS2540nm参波长λR26344nm
B标准曲线绘制
精密称取靛蓝品溶液（1ml氯仿含40μg靛蓝）025050…20ml靛玉红品溶液（1ml氯仿含10μg靛玉红）0204…140ml分放入10ml量瓶中氯仿稀释刻度分述等吸收波长处测差吸收度：
ΔA1A566nmA5142nmΔA2A540nmA6344nm
然ΔAC做标准曲线求出元回方程：
ΔA1002241×C1 （r110000）
ΔA2004060×C2+00055 （r210000）
式中C1 C2分靛蓝靛玉红浓度（μgml）
C含量测定
精密称取喉痛消炎丸细粉约02g索氏提取器中氯仿提取兰色（4时）氯仿定容50ml量瓶中精密吸取5ml述溶液10ml容量瓶中加氯仿刻度样品溶液样品溶液λS1λR1处测定ΔA样1值ΔA1式求出靛蓝浓度样品中靛蓝含量样λS2λR2处测定ΔA样2值ΔA2式求出靛玉红浓度样品中靛玉红含量
4实例2差示光谱法测定含牛黄中成药中胆红素含量
胆红素中药牛黄重部分天然牛黄中胆红素含量高达40~50牛黄类中成药达百余种测定胆红素含量控制类中药质量必
A 测定原理
胆红素具高轭体系结构吸收光谱波长453nm处吸收见光射胆红素易氧化成兰色产物453nm处吸收度明显降低图
a：光前b：光
B含胆红素中药制剂般含数种波长453nm处吸收组分直接色法测定胆红素含量易受组分影响时利存组分选定光条件吸收光谱光前保持变性质差示光谱法胆红素进行定量
通实验知浓度胆红素品溶液日光射25分钟红外灯（250W）射33时吸收度稳定实验时选日光射30分钟红外灯射4时测ΔA值
C标准曲线绘制
精密称取胆红素2mg50ml棕色量瓶中加入适量冷（10℃）酸性氯仿溶液（150ml氯仿中含005ml浓盐酸）冰水浴中超声振荡20min稀释刻度制成储备液精确吸取0408121620ml储备液510ml量瓶中加冷酸性氯仿刻度测光前453nm处吸收度吸收度差值ΔA胆红素溶液浓度C（ugml）回方程ΔA00804C+000570（r09995）（光反应外余操作需避光）
D干扰性实验
分制六应丸六神丸牛黄消炎丸空白样品液453nm处测光前A值计算ΔA值实验表明三种成药空白溶液ΔA值零零说明干扰组分光条件干扰胆红素测定
E含量测定
精密称取六应丸六神丸60mg 牛黄消炎丸120mg 置10ml 带塞试中准确加入冷酸性氯仿10ml 冰水浴中振荡20min 滤弃初滤液测续滤液光前A 值算出ΔA 值回方程算出样品含量测定3 批述3 种制剂中胆红素含量含量次0829~115 0592~0999 0487~0645mgg
二．红外分析法
4 常25μm ~ 25μm中红外区
5定量分析
红外光谱定量分析通特征吸收谱带强度测量求出组份含量理LambertBeer定律红外光谱谱带较测定波长选择余方便单组份组份进行定量分析
外该法受样品状态限制定量测定气体液体固体样品红外光谱定量分析应广泛
红外光谱定量灵敏度较低尚适微量组份测定
三荧光分析法
6法优点灵敏度更高（<104μgml）选择性试样量少等特点特适体中药分析
7足处干扰素实验条件严格
8荧光分子结构关系
π电子轭程度越高更易产生荧光
（1）刚性面结构(分子刚性增加荧光增强)
（2）取代基（供电子基团常荧光增强吸电子基团荧光减弱）
（3）饱稠环结构（利荧光发射）
（4）分子处环境
第四章 色谱分析法应
1 色谱法（Chromatography）种物理物理化学分离分析方法形成气相色谱液相色谱薄层色谱离子色谱亲色谱超界流体色谱毛细电泳电色谱等分支种色谱仪器质谱红外核磁等技术联创立复杂混合物分析新手段成发展快应广分析方法
2分离原理利物质流动相固定相两相中分配系数差异吸附解吸差异差异分离
3．分离原理分类
（1）吸附色谱法（adsorption chromatography）利吸附剂表面组分物理吸附性差分离色谱法称吸附色谱法吸附色谱GSCLSC等
（2）分配色谱法（partition chromatography）利固定液组分分配性差异分离色谱法称分配色谱法分配色谱法GLCLLC等
（3）离子交换色谱法（ion exchange chromatographyIEC） 离子交换树脂作固定相利树脂离子交换基团样品离子交换力差分离色谱法称离子交换色谱法
（4）尺寸排阻色谱法（size exclusion chromatographySEC） 孔凝胶作固定相利凝胶孔穴尺寸分子排阻效应差分离色谱法称尺寸排阻色谱法
（5）亲色谱法（affinity chromatography）具生物活性配位基（抗体酶等）键合非活性载体基质表面构成固定相利生物分子固定相表面配位基专属亲力分离色谱法称亲色谱法
（6）毛细电泳法（capillary electrophoresisCE）样品毛细液体介质中电场力作分离分析方法称毛细电泳法
（7）毛细电色谱法（capillary electro chromatographyCEC）分离机制色谱电场两种作力样品组分分配系数电泳速度差分离色谱法称毛细电色谱法
4吸附剂应具备条件
（1）逆吸附分离物质
（2）会引起吸附物质化学变化
（3）吸附剂粒度适洗脱剂定速率流出（5~6mlmin）
5常吸附剂种类
（1）硅胶（2）氧化铝（3）孔树脂（4）硅藻土
（5）Sephadex LH 20（6）C18C8
6 薄层色谱优点：
（1）设备简单
（2）展开时间短
（3）分离效果
（4）显色方便喷洒腐蚀性显色剂加热等
（5）灵敏度高
7薄层色谱法分离机理分类五种形式
（1）吸附薄层色谱常硅胶硅藻土氧化铝吸附剂
（2）分配薄层色谱常纤维素硅藻土硅胶载体载体吸附定量水溶剂（缓液酸溶液甲酰胺丙二醇等）固定相固定相相混溶（部分混溶）展开剂作流动相
（3）离子交换薄层色谱：离子交换剂制作薄层
（4）排阻薄层色谱：葡聚糖凝胶制作薄层展开剂流薄层时混合组分分子葡聚糖凝胶薄层反复进行扩散排阻混合物达分离
（5）亲色谱
8 应广泛吸附薄层色谱利吸附程两规律： （1）吸附逆吸附解吸附处动态衡中
（2）吸附剂物质吸附行差异
9 吸附剂选择
薄层色谱中吸附剂展开剂选择色谱分离否获成功关键
A硅胶略带酸性适分离酸性中性物质商品硅胶分两类：硅胶H（加石膏）硅胶G（加石膏）
B氧化铝略带碱性适分离碱性中性物质
C聚酰胺分离黄酮类成分
10 吸附剂活化通定温度烘烤颗粒中水分
11选择展开剂两原：
（1）展开剂分离物质应定解吸力太般展开剂极性应分离物质极性略
（2）展开剂应分离物质定溶解度分离物质溶解展开剂中展开剂前移动
12 薄层扫描法
（）测定原理
薄层扫描仪单色光透薄层板斑点时部分单色光斑点吸收透射光强度减弱通直接测量透射光强度测定方法称透射法
单色光薄层板斑点表面反射出时部分单色光斑点吸收反射光强度减弱通直接测量反射光强度测定方法称反射法
利两束波长单色光λS λR交射位置测定吸收值差△A计算样品含量方法称双波长测定法
（二）光源选择
A 见光 薄层展开斑点身颜色喷显色剂斑点显色斑点吸收曲线见光区钨灯光源
B紫外光 薄层斑点中物质紫外光吸收紫外光扫描样显色避免显色引起误差方法简便灵敏度高适反射法
值注意化合物斑点薄层 λmax溶液中氘灯光源
C荧光 利紫外光物质激发产生荧光强弱测定化合物含量般高压汞灯氙灯光源
13 新技术介绍：高压高效板色谱
OPLC结合TLCHPLC 优点创新板柱代HPLC色谱柱应程中分析够样品制备样品高压恒定流速元配展开剂情况快速展开保证极高板效率达分离效果意时间中断展开程观察展开效果影响进步展开OPLC板柱物质高压密闭环境线性展开分离物质会出现规扩散受外界温度湿度影响
第五章 气相色谱分析
1气相色谱法（Gas ChromatographyGC）气体流动相色谱方法气相色谱程分离样品（组分）种惰性气体（载气）携带通层析柱（色谱柱）样品中混合组分载气固定液间分配固定液根样品分配系数选择加阻滞直载气中形成分离谱带止谱带载气流出色谱柱先次序检测器检测器载气中组分浓度变化转变相应电讯号作时间函数记录仪峰形式记录色谱图
2 评价柱效选择操作条件气相色谱两基理：塔板理速率理
速率理指出色谱柱填充均匀程度填充物粒度流动相种类流速固定相液膜厚度柱效峰宽影响色谱分离操作条件选择提供理指导
3 操作温度确定
（1）柱温选择应根样品沸点固定液配进样量检测器灵敏度综合考虑
气相色谱操作温度较宽196~450℃
实际应中考虑固定液低高温度高操作温度应选择固定液沸点约低150~200℃规定高温度低50~100℃
（2）分配系数柱温关系般情况较低柱温改善分离
柱温选择基原：难分离组分分离度前提采较低柱温
柱温沸点间关系见书
4GC 检测器类型 热导检测器 (TCD)氢火焰离子化检测器 (FID)
检测器
样品类型
灵敏度范围
FID
碳氢化合物
10100 pg
TCD
载气外物质
5 100 ng
ECD
机卤化物氯化溶剂农残
0051 pg
NPD
机氮化合物机磷化合物
0110 pg
检测器总求类型样品浓度范围操作条件够达响应快灵敏度高敏感性稳定性线性范围宽目作检测器质量指标
5热导检测器 (TCD) 氢火焰离子化检测器 (FID)
TCD 非破坏性浓度型检测器
FID 破坏性质量型检测器火焰中生成量碳正离子收集计算形成检测器信号
FID没响应物质 稀气体氮氧化物卤化硅H2O杂环化合物
第六章：高效液相色谱
1流动相应该：
HPLC 级
滤 (045 um 02 um)
脱气尤低流速时
相溶
2溶剂滤： 干净溶剂溶剂瓶中长菌溶剂会阻塞溶剂滤器降低泵操作性遵列建议提高性延长溶剂滤器寿命：
菌溶剂瓶避免溶剂长菌
滤膜滤溶剂微生物
两天更换滤溶剂
避免溶剂瓶直接日
3正确进样方式
1)进样量：定量环体积半满刻度进样（需推进3~5倍量进样环体积样品样进样准确）
2)进样动作：Load状态推针动作缓防样品出进样先切换Inject状态拔针防倒吸产生气泡
3)清洗：Inject状态清洗
4)废液出口末端应进样口水防样品倒流产生虹吸
4光电二极阵列检测器（DAD）
80年代出现种光学通道检测器晶体硅紧密排列系列光电二极二极越分辨率越高般二极应接受光谱纳米谱带宽单色光
二极阵列检测器工作原理复光通流动池时组分选择性吸收进入单色器射二极阵列装置纳米波长光强变成相应电信号强度通计算机处理获三维光谱—色谱图吸收光谱组分定性色谱峰定量中药成分研究中广泛应
5 蒸发光散射检测器
蒸发光散射检测器（evaporative lightscatter detector ELSD）90年代通型检测器种物质时响应利定条件粒子数量变光散射强度正溶质决定粒子进行测量：样品结构需具备紫外发色团合适折射率梯度洗脱流动相系统温度变化敏感种物质响应子次分析中时检测成分杂质等
工作原理：色谱柱流出液引入雾化器通入气体混合形成均匀微液滴加热漂移蒸发流动相样品组分形成气溶胶然进入检测器强光激光射气溶胶产生光散射光电二极检测散射光灵敏度较低尤低紫外吸收组分外流动相必须挥发性含缓盐类
6分离度 反映相邻两峰分开程度应合适范围太两峰未彻底分离太分离时间长R15基线分离
7提高分离度：
1)通述方法增加保留时间：
选择合适分离参数增加固定相浓度增加色谱柱长度
2)通述方法降低谱带宽度：
均载体 仔细填充柱子 选择粒度载体
优化流速 减进样量 降低系统死体积
降低输出回路响应时间
8 超界流体色谱 supercritical fluid chromatographySFC
超界流体做流动相流动相溶剂化力进行分离分析色谱程20世纪80年代发展完善起种新技术超界流体物质高界压力界温度时种状态具气体液体某性质具气体低粘度液体高密度介气液间较高扩散系数等特征SFCGCLC补充 SFC解决气液色谱分析难题分析气相色谱难汽化挥发性样品时具高效液相色谱更高效率分析时间更短
超界流体色谱兼气相色谱液相色谱特点分析气相色谱适应高沸点低挥发性样品高效液相色谱更快分析速度条件操作温度决定选流体常二氧化碳氧化亚氮超界流体容易控制调节进入检测器前转化气体液体保持超界流体状态现液相气相检测器相连接种类型检测器相匹配扩应范围分类力定性定量方面较选择范围种梯度技术优化色谱条件高效液相色谱法易达更高柱效率
9高效毛细电泳法
high performance capillary electrophoresis HPCE）
毛细电泳特点：
毛细电泳突出优势概括三高二少高灵敏度高分辨率高速度进样少溶剂量少等
10液相色谱—质谱联常质量分析器
四极质谱仪 (quadrupole mass spectrometer Q)
三级串联四极质谱仪（triplestage quadrupole mass spectrometer TQMSQQQ）
飞行时间质谱仪 (timeofflight mass sectrometer TOF MS)
离子阱质谱仪（ion trap mass spectgrometer IT MS)
第八章 体中药分析药代动力学研究
1体中药分析测定指药物（中药制剂）吸收进入体循环相数量出现相速率代谢物测定
体药物测定真正反映药物利情况通常称体生物利度测定
体生物利度测定方法受试者药定时测定体液（血尿唾液等）中药物浓度药理效应强度
2 生物利度评价方法分类
生物利度研究方法血药浓度法尿药数法药理效应法等研究方法选择取决研究目测定药物分析方法药物药代动力学性质
3．生物样中药物浓度分析方法
生物利度研究中样品取样量少药物浓度低源性物质存干扰求分析方法专属性强准确性高精密灵敏样品中测定原型药物活性代谢产物常色谱法测定测物质代谢产物源性物质分离度达求
（1）专属性（specificity）：方法特异性必须证明测定物质原形药物特定代谢产物源性物质相应代谢产物干扰样品分析
（2）标准曲线：标准曲线应覆盖测样品全部浓度范围58浓度制备高浓度低浓度测定均达求精密度准确度
（3）准确性（accuracy）：准确性指测样品浓度真实浓度接程度准确性回收率表示般70115％范围考察测定方法准确性应空白生物样品中加入已知量药物成高中低三浓度浓度重复5次测定
（4）精密度（precision）：方法精密度日日间相标准差（RSD）表示考察精密度少选择三浓度进行低浓度选择定量检测限附高浓度选择标准曲线限附浓度重复5样品RSD应15％定量检测限附放宽20％
（5）灵敏度（sensitivity）：检测灵敏度通较已知低浓度测试药物样品空白样品测定信号确定检测低浓度检验低浓度信号空白样品信噪3121时定检测灵敏度
（6）定量检测限（limit of quantitaion）：表示检测符合准确度精密度求低药物浓度应该少测定35半衰期时样品中药物浓度l10l20Cmax浓度
（7）样品稳定性：生物利度研究测定样品常需贮存测需考察样品室温冰冻冻融等贮存条件时间稳定性影响
4中药化学成分体代谢
（）中药成分肠菌生物转化
肠菌中药成分结构进行生物转化现研究成果肠进行生物转化反应类型叙述：
1）水解反应 2）氧化反应 3）原反应4）异构化反应
5）含氧化合物含氮化合物转化
（二）中药成分肝脏代谢反应
氧化原水解反应称药物代谢第相（phase I ）反应结合反应称药物代谢第二相（phase II） 反应药物结合反应指具羟基羧基氨基等官团药物作生物体成分糖硫酸盐氨基酸等结合具官团药物需氧化原水解等转化产生官团生物体成分结合排出体外
1）药物代谢氧化反应
氧化反应药物代谢中常见重反应部分氧化反应肝脏微粒体单加氧酶末端酶系细胞色素P450催化
4）药物代谢结合反应
药物代谢结合反应药物第相氧化原水解等生物转化代谢物进入第二相生物源性分子葡萄糖醛酸硫酸盐磷酸盐甘氨酸氨基酸硫氰酸盐结合乙酰化甲基化等生成水溶性药理作产物尿液胆汁排泄
5 药物代谢作特殊条件机化学反应定特点纳：（略P257）
（1）氧化反应 （2）反应底物种类（3）代谢物水溶性增加（4）药物转化样性（5）药物代谢种素作结果：
6．生物体检测样品选择
（1）血液：采血部位动物异兔常取耳静脉血狗宜取胰静脉血取血量12ml必时体做实验注意试验前二周受试者药物饮酒尤服诱导抑制酶作药物
血浆血清常采血样般全血全血中加入肝素抗凝剂离心血浆血浆纤维蛋白血清血浆分离应快进行分析般超24时分离放置冰箱中冰冻保存
血样取提取净化分离进行效分析测定
净化分离时首先蛋白质蛋白质方法：
A加机溶剂中性盐蛋白质脱水沉淀
B利酸性沉淀重金属离子蛋白质形成溶性沉淀
C加热蛋白质变性超滤透析方法蛋白质葡萄糖凝胶（Sephadax系列）分离生物制品时极常分亲水型疏水型离子交换型
（2）尿液
1） 尿样取采冰箱冷藏室温效应加入防腐剂（甲苯氯仿等）抑制细菌生长
2）样品制备时注意蛋白质
3）尿液中测成分代谢产物常葡萄糖醛酸硫酸酯类结合缀合水解方法进行处理水解方法酸水解酶水解酸水解通常机酸盐酸等酶水解β葡萄糖醛酸酶芳基硫酸酯酶等
7采体分析方法研究中药药代动力学关键建立合适体微量检测方法该方法应满足求：
（1）灵敏度高检出微量痕量中药效成分
（2）专属性强排中药效成分代谢产物机体源性物质干扰
（3）准确度高精密度高
（4）够快速准确报告测**果
（5）操作简单费低廉
第九章 生物碱分析
1生物碱类型
异喹啉衍生物类 黄连罂粟吐根 锡生藤延胡索防已石蒜
吲哚衍生物类： 番木鳖毒扁豆 麦角萝芙木
莨菪烷衍生物类：古柯颠茄洋金花
2酸碱性
胺类碱性强弱取代氢烃基种类数量关
1）氨分子中氢原子脂肪烃基取代脂肪烃基斥电子基取代氮原子周围电子云密度增电负性增强吸引质子力加碱性加强强度：
叔胺 ＞ 仲胺 ＞ 伯胺 ＞ 氨
2）季胺碱离子形式存碱性更强
3）N原子酰胺形式存时碱性消失
3．溶解度
游离生物碱极性较溶乙醇氯仿丙酮乙醚等机溶剂溶难溶水
生物碱盐类极性较尤机酸盐分子机酸盐易离子化生成带正电荷生物碱阳离子溶难溶苯氯仿乙醚等
生物碱盐类性质点相反种性质生物碱提取分离精制
生物碱机酸盐易溶水溶解度区般含氧酸硫酸磷酸等盐水溶度较少数化合物盐酸盐氢碘酸盐难溶水（盐酸檗碱）
4．常生物碱试剂：
碘碘化钾（Wagner试剂）碘化铋钾（Dragendorff试剂）碘化汞钾（Mayer试剂）硅钨酸（Bertrand试剂）等
5生物碱试样提取
生物碱溶氯仿甲醇乙醇等机溶剂季胺碱分子量较低含极性基团较生物碱外般均溶难溶水生物碱酸结合成盐时易溶水醇基种特性溶剂生物碱中药中提出
6生物碱试样精制
1）萃取法 利游离生物碱盐溶解度差达精制目
2）色谱法
3）离子方法
4）超界流体萃取法
该法操作简单快速萃取效果索氏提取法相媲美样品提取完全萃取液滤直接进样分析稳定成分测定更显优越性
7化学薄层色谱定性分析
（）化学定性分析
1）沉淀反应： 中药样品细粉水稀酸溶液温浸滤液滴加列沉淀试剂应3种试剂显阳性反应
氨基酸蛋白质条件常干扰必时通薄层分离滤液碱化氯仿乙醚提取提取物溶稀酸溶液进步实验应显阳性反应
2）常沉淀试剂
（1）碘化汞钾试剂（Mayer）生成白色黄色沉淀
（2）碘化铋钾试剂（Dragendorff）生成橙色沉淀
（3）碘碘化钾试剂（Wagner）生成褐色暗褐色沉淀
（4）磷钼酸试剂（Sonnenschein）酸性溶液中生成白色黄色沉淀加入氨水变成蓝色
（5）苦味酸试剂（Mager）微酸性溶液中生成黄色沉淀
（6）雷氏铵盐试剂（Ammonium reineckate）酸性溶液稀醇液中生成红色定性沉淀
（二）薄层色谱定性分析
1）常生物碱展开系统：
（1）甲苯乙酸乙酯二乙胺（7：2：1）：适种生药中生物碱分离初筛
（2）乙酸乙酯甲酸水（100：135：10）：适水溶性生物碱
（3）氯仿二乙胺（9：1）氯仿甲醇（9：1氨蒸气饱）氯仿甲醇氨水（5：06：6d）：适叔胺碱
（4）正丁醇冰醋酸水（7：1：2）：适季胺碱
2）吸附剂
吸附剂身酸碱性影响生物碱分离
硅胶身略带酸性生物碱吸附力较强中性溶剂展开时Rf值时斑点出现拖尾碱性展开剂．集中斑点硅胶吸附剂分离生物碱时中性展开剂中加入少量碱二乙胺氢氧化铵等
涂铺硅胶薄层时稀碱溶液成碱性硅胶薄层中性展开剂分离生物碱
碱性氧化铝身带碱性中性展开剂生物碱分离
3）显色剂
碘化铋钾试剂通生物碱显色剂植物中非生物碱物质蛋白质氨基酸某苷糖嘌呤甲基化胺鞣质铵盐等特具轭羰基（酮酸）酯非含氮物质香豆素黄酮查耳酮强心苷产生正反应误认生物碱干扰检出产生假阳性反应杂质须净化生物碱方法
8 生物碱定量分析
．色法
（）酸性染料色法
法测定条件：
（1）介质pH关键
（2）酸性染料种类
（3）机溶剂选择
二．薄层色谱法
三．高效液相色谱法
（1）离子交换 HPLC
（2）反相HPLC
改善分离效果方法：
1） 采封端固定相（游离硅醇基越少越）
2）碱性流动相 减少生物碱反相固定相拖尾碱性流动相化学键合相稳定性限制流动相pH值超8
克服HPLC拖尾现象通常流动相中加入碱称离子抑制剂生物碱HPLC分析中碳酸铵醋酸钠磷酸钠均常离子抑制剂离子反相色谱生物碱分离方面应已证明非常成功允许生物碱分离酸性条件进行避免碱性化合物酸性硅醇基化学吸附问题
流动相中加入低浓度长链铵分析碱性化合物色谱峰变完美
3） 流动相中加入缓液改善分离效果磷酸盐缓液醋酸盐缓液等
（3）离子HPLC
（4）正相色谱
硅胶弱酸性硅醇基存避免化学吸附造成拖尾常常溶剂中加入碱性改善剂氨二乙胺三乙胺类似TLC分析系统碱性条件硅胶G稳定性较差硅胶G溶解速度碱性改善剂机溶剂性质关样限制硅胶G作固定相HPLC分析生物碱方面应某溶剂系统言柱寿命极短甚天
9含生物碱常中药分析
黄连质量分析 (P306)
三．延胡索质量分析 (P310)
第十章 皂苷分析
1甾体皂苷结构特征分布
1)甾体皂苷元数轭系统紫外区明显吸收峰浓硫酸作220600nm范围出现吸收峰作甾体皂苷定性定量分析
2)甾体皂苷类成分部分集中单子叶植物百合科薯蓣科龙舌兰科延龄草科菝契科（二科分类系统中广义百合科中）双子叶植物仅少数种属中分布
含甾体皂苷常中药穿山龙绵萆薢粉萆薢重楼土茯苓知母麦冬天冬等
2三萜皂苷植物界较广泛分布
中双子叶植物分布较普遍含三萜皂苷植物较科五加科伞形科夹竹桃科萝藦科菊科石竹科葫芦科戟科豆科桃金娘科远志科毛茛科蔷薇科茜草科等
许常中药含三萜皂苷参三七甘草榆款冬花酸枣仁紫菀桔梗柴胡远志黄芪威灵仙商陆白头翁等
3．常皂苷显色反应 P319
（1）醋酐 硫酸反应（LibermannBurchard反应）
（2）三氯醋酸反应（RosenHeimer反应）
（3）氯仿 浓硫酸反应（Salkowski反应）
（4）冰醋酸乙酰氯反应（Tschugaefb反应）
（5）五氯化锑反应（Kahlenberg反应）
（6）苯肼反应
（7）芳香醛硫酸高氯酸反应
4皂苷定性分析
化学定性分析
（）显色反应
皂苷类化合物常见显色反应：醋酐 硫酸反应三氯醋酸反应氯仿 浓硫酸反应冰醋酸 乙酰氯反应苯肼反应芳香醛 硫酸高氯酸反应等
（二）泡沫反应
取含皂苷类成分中药粉末1g加水10m1煮沸10min滤滤液试强烈振摇产生持久性泡沫（15min）阳性反应
5皂苷定量分析
薄层色谱法
()薄层条件
1．吸附剂
皂苷进行薄层色谱分析吸附剂硅胶氧化铝时分离需加入定硝酸银
硝酸银处理硅胶（氧化铝）薄层具相似极性分子中带数目双键双键位置化合物够开
2．展开剂
皂苷极性较般分配薄层效果较亲水性强皂苷般求硅胶吸附活性较弱展开剂极性较效果
常溶剂系统：氯仿 甲醇 水（65：35：10层）正丁醇 醋酸 水（4：1：5层）等
3．显色剂
薄层色谱时皂苷常显色剂三氯醋酸氯磺酸 醋酸浓硫酸5020硫酸三氯化锑磷钼酸浓硫酸 醋酸酐碘蒸气等显色剂应优缺点
（1）25磷钼酸乙醇溶液
（2）硫酸 甲醇（1：1）
（3）氯磺酸 醋酸（1：2）溶液
（4）碘蒸气
二．色法
皂苷类成分加入适显色剂呈色见光区进行测定种测定方法测定样品中总皂苷总皂苷元含量
皂苷类成分显色反应专属性般较差反应较灵敏方法简便易行
显色剂强氧化性强酸试剂皂苷强酸试剂发生氧化脱水脱羧缩合等系列化学反应生成具烯键结构缩合物显色
常显色剂浓硫酸高氯酸醋酐 硫酸芳香醛 硫酸等
三．高效液相色谱法
现蒸发光散射检测器（ELSD）应皂苷类成分分析更便利ELSD种通型检测器流动相热气流热气化喷雾进入加热溶剂挥发分析检测物质颗粒通狭窄光束散射光光电倍增收集ELSD响应取决分析物质颗粒数量ELSD仅挥发分析物质产生响应梯度洗脱时提供稳基线
6含皂苷常中药分析
．参质量分析 P333
二．甘草质量分析 P336
三．黄芪质量分析 P338
四．重楼质量分析 P340
第十章 黄酮分析
1结构类型分布
1)黄酮类成分基母核认2苯基色原酮
具C6C3C6结构成分广义称黄酮类成分
2)黄酮类成分然界分布规律纳 P344
2 颜色
黄酮类成分颜色分子中否存交叉轭体系助色团数目取代基位置关
色原酮色吡酮环第2位引入苯基形成色原酮芳香环轭体系构成生色团基结构数黄酮类成分呈黄色
黄酮类成分颜色轭体系增加助色团（OHOCH3等）数量增加深
黄酮黄酮醇查耳酮橙酮显典型黄色
醇羟基数目结合位置显色较影响
1）OH数目越显色越深
2）色原酮苯环（A环）OH（57位）显色影响
3）位B环OH（3`4`位）显色影响显深黄色
4）3位OH（黄酮醇）黄酮呈灰黄色
5）C2 C3单键时AB环轭体系（二氢黄酮二氢黄酮醇）呈色异黄酮轭较少呈微黄色色
6）花青素苷颜色pH异般酸性条件呈红色pH8左右呈紫色碱性条件（pH11）呈蓝色
3 酸碱性
（1）1位氧原子具未电子呈弱碱性强酸成盐
（2）分子中具酚羟基具弱酸性强碱形成水溶性盐性质常黄酮类化合物分离
4显色反应
1）金属离子络合
铝盐：常试剂1三氯化铝硝酸铝溶液生成络合物黄色荧光
锆盐：2二氯氧化锆甲醇液生成黄色络合物
铅盐：常1醋酸铅碱式醋酸铅水溶液生成黄红色沉淀
镁盐：常醋酸镁甲醇液二氢黄酮二氢黄酮醇类显天蓝色荧光黄酮黄酮醇异黄酮类等显黄—橙黄褐色
2)原反应
（1）盐酸 镁粉反应 检查黄酮黄酮醇二氢化合物
（2）盐酸 锌粉反应 检查二氢黄酮醇
（3）钠汞齐反应 检查黄酮
（4）四氢硼钠（钾）反应 检查二氢黄酮醇
3)显色反应
（1）酚羟基显色反应（2）碱性溶剂反应
（3）浓硫酸反应 （4）硼酸反应
5紫外吸收 黄酮类成分两较强吸收峰：
第1吸收峰位300400nm称Ⅰ带B环桂皮酰基引起
第2吸收峰位240285nm称Ⅱ带A环苯甲酰基引起
类型黄酮吸收（nm）
1）黄酮 I带：304350II带：250270
2）黄酮醇 I ：358385 II ：250270
3）二氢黄酮I：310330（吸收弱）II ：275290
4）异黄酮 I：吸收 II：250270
5）查耳酮 I：360390 II：240260（吸收弱）
6位移问题位移试剂：
常位移试剂三氯化铝醋酸钠甲醇钠硼酸硼酸钠黄酮类成分吸收选择性灵敏度提高消杂质干扰利含量测定
7黄酮定性分析
化学定性分析
1．盐酸 镁粉反应
（1）槐花鉴 取槐花粉末01g加乙醇10ml加热5min滤取滤液1ml加镁粉少量盐酸23滴显樱红色
2．四氢硼钾反应
3 三氯化铝反应
野菊花鉴：取野菊花粉末3g加乙醇40ml加热回流1h滤取滤液1滴点滤纸喷洒三氯化铝试液晾干置紫外光灯（365nm）观察显黄绿色荧光
二色谱定性分析
黄酮类成分薄层定性般采吸附薄层常吸附剂硅胶聚酰胺纤维素硅酸镁氧化镁
硅胶薄层分离弱极性化合物较
聚酰胺薄层分离含游离酚羟基黄酮苷较
纤维素薄层适合分离糖苷混合物
1．硅胶薄层 常溶剂系统：
（1）甲苯 甲酸乙酯 甲酸（5：4：1） 分离黄酮苷元
（3）氯仿 甲醇（85：15） 分离黄酮苷
硅胶分离黄酮成分遵循正相色谱规律化合物极性越强需溶剂极性越Rf值序：
RCH3 ＞ RH ＞ ROCH3 ＞ RO糖 ＞ ROH
2 聚酰胺薄层 常溶剂：
（1）甲醇 水（8：2）
（2）苯 丁酮 甲醇（60：20：20） 分离黄酮苷元
8 黄酮定量分析
四高效液相色谱法
2）反相色谱
A分离OH黄酮苷苷元
B烷基键合相常固定相分离效果常C8（辛烷基）C18（十八烷基）键合相
C黄酮分子中OH存流动相中加入少量酸峰形变更尖锐流动相乙腈 水甲醇 水等组成系统较甲醇水醋酸（磷酸缓液）
9含黄酮常中药分析
黄芩质量分析
葛根质量分析
第十二章 醌类分析
1醌类化合物四种结构类型：
（1）萘醌（含紫草中）（2）菲醌（丹参中含量菲醌类衍生物丹参酮隐丹参酮等）（3）苯醌（4）蒽醌
2分布情况
中药中含蒽醌成分蓼科植物中黄虎杖朱砂莲首乌等茜草科茜草百合科芦荟鼠李植物中含种蒽醌类化合物170种
3药理活性
A 泻作
（1）蒽醌苷致泻作 > 苷元
（2）分子中含羧基蒽苷 > 含羧基蒽苷
（3）二蒽酮苷（番泻苷AD）二蒽酚类（原型）> 蒽醌苷（氧化型）
B 抑菌作：苷元强苷
C 作：抗癌作（黄素黄酸等）
抗抑郁作（金丝桃素 中位萘骈二蒽酮贯叶连翘）
4酸性 游离蒽醌结合蒽醌含酚羟基具定酸性碱形成类盐物碱性溶液中中性机溶媒中溶解度
1) 带羧基酸性 > 带羧基
2) β羟基酸性 > α 羟基酸性
3) 羟基数目越酸性越强
蒽衍生物酸性强弱序：
COOH ＞ 2β酚羟基 ＞ 1β酚羟基 ＞2α酚羟基＞1α酚羟基
（溶NaHCO3溶液）（溶 Na2CO3） （溶1 NaOH）（溶 5NaOH溶液）
5显色反应
1碱反应
蒽醌类成分遇碱显红色紫红色称Borntrager’s反应蒽酮蒽酚二蒽酮类必须氧化成蒽醌会呈阳性反应
游离蒽醌羟基位置产生颜色(见书370)
通显色剂：1）氨气 2）10氢氧化钾甲醇溶液
3）35氢氧化钠溶液碳酸钠溶液
碱反应稳定性较差注意事项：
（1）产物颜色光氧稳定日光放置15min吸收度降50求避光保存（1h稳定）
NaOH+氨水混合溶液稳定性保存2h
（2）干扰较
2 醋酸镁反应优点
（1）醋酸镁试剂甲醇溶剂反应生成物甲醇中溶解良Borntrager’s反应常含溶性颗粒
（2）醋酸镁反应呈现颜色稳定日光少维持45min未见明显变化
（3）反应灵敏度较高
醋酸镁反应中般试剂浓度05醋酸镁甲醇溶液
3．亚硝基二甲基苯胺反应
羟基蒽酮类尤18二羟基蒽酮衍生物910位未取代时01亚硝基二甲基苯胺吡啶溶液反应呈色
反应蒽酮类化合物定性检查含量测定该反应受蒽醌类黄酮类香豆素糖类酚类成分干扰
6 蒽醌定性分析
1．碱液试验
中药提取物升华物加氢氧化钠氨水试液显橙红色红色蓝色黄决明子茜草等
决明子鉴 P371
二薄层色谱定性分析
2．分析实例
样品甲醇乙醇提取物（总蒽醌）提取物水解氯仿乙醚提取苷元进行薄层色谱显色方法喷氢氧化钾溶液氨气熏紫外灯观察荧光
7 蒽醌定量分析
1色法
该方法蒽醌类成分碱液醋酸镁试液生成红色500550nm处吸收进行色法测定
例2：黄中蒽醌类成分测定
3高效液相色谱法
黄中氧化型蒽醌苷元（A）苷（C）原型蒽醌苷元（B）苷（D）测定
HPLC测定流程图
8含蒽醌常中药分析
黄质量分析P385
9萘醌菲醌分析
紫草质量分析 P389
二．丹参质量分析 P392
第十三章 香豆素分析
1含香豆素类化合物常中药白芷秦皮独活前胡阿魏补骨脂茵陈蒿川芎防风蛇床子等
2理化性质
1．通性
具芳香气水蒸气挥发升华
溶水难溶水溶石油醚苯乙醚氯仿乙醇等溶剂中定量测定时氯仿乙醇提取
2．碱作
香豆素具αβ饱δ酯结构稀碱溶液中渐渐水解开环生成式邻羟基桂皮酸盐稳定酸化．复原
利种性质处理复杂植物提取物香豆素类中性酸性酚性成分分离开
3．显色反应
（1）异羟基肟酸铁反应：
香豆素具酯环异羟基肟酸铁反应产生紫红色鉴色测定反应：
（2）酚类试剂反应：
该类化合物具酚羟基常规酚类试剂反应三氯化铁硝酸银氨溶液三氯化铁 铁氰化钾
果香豆素化合物C6位（酚羟基位）没取代基 Emerson试剂反应显橙红色Gibbs试剂反应显蓝色
Emerson反应香豆素类化合物溶碱性溶液中加入2 4 氨基安林溶液数滴8铁氰化钾溶液23滴显色
4．荧光紫外吸收
（1）香豆素类化合物紫外光射显蓝色荧光作定性鉴作定量测定
（2）羟基香豆素紫外光强荧光难辨认呋喃香豆素较弱紫外光显示蓝紫棕绿黄等色必时喷10 KOH醇液20 SbCl3氯仿液显色
（3）香豆素类化合物羟基芳环形成轭体系具较强紫外特征吸收香豆素化合物pH条件表现光谱特性该类成分分析具重意义
3 香豆素定性分析
．化学定性分析
1．荧光反应 （2）前胡鉴
取前胡粉末1g加乙醚10ml浸渍2h取乙醚液2 滴分点两张滤纸片置紫外光灯（365nm）观察显淡天蓝色荧光然滴加15％氢氧化钠溶液数滴2 min荧光消失张滤纸片避光保存张滤纸片曝光约3h置紫外光灯（365nm）观察曝光者天蓝色荧光加强避光者显荧光
四．定量分析方法
（）色法
（1）该方法基香豆素类化合物酯环官团苯环羟基性质选择适显色剂反应产生颜色进行色方法异羟肟酸铁4 氨基安林氨基林三氯化铁三氯化铁 铁氰化钾磷钼酸磷钨酸
（2）果酚羟基位邻位未取代碱性溶液中重氮化氨基苯磺酸反应生成紫色红色
（3）香豆素衍生物C6位没取代基Gibbs试剂反应生成蓝色
（二）紫外分光光度法
1．应原理 香豆素类衍生物紫外吸收光谱般表现λmin244士4nmλmax275士4nmλmin300士5nmλmax315士8nm
4含香豆素常中药分析
秦皮质量分析 P406
第十四章 挥发油分析
1．挥发油类成分分布
挥发油（volatile oils）存植物体中类水蒸气蒸馏水相混溶油状液体常温挥发部分具香气
n 品种植物生长环境采收季节挥发油含量品质均显著差异
n全草类药材般开花前期含苞放时含油量高薄荷
荆芥紫苏等
n根根茎类药材秋天成熟挥发油含量高白 术苍术
n挥发油中含化学成分较复杂种中药挥发油常含十种二百种成分中某种某数种成分占较量
n挥发油类成分植物界分布极广泛存植物花蕾茎叶根茎中植物腺毛腺鳞油油室油腔油细胞分泌细胞树脂道中
2挥发油提取方法
1）蒸馏法：水蒸馏法水蒸气蒸馏法
2）浸取法：宜蒸馏法提取挥发油原料直接利机溶剂进行萃取常方法油脂吸收法溶剂萃取法超界流体萃取法
3）冷压法：适新鲜原料桔柑柠檬果皮含挥发油较原料撕裂捣碎冷压静置分层离心机分出油分粗品
3挥发油鉴定
官基团鉴定
n1）酚类：加三氯化铁试剂呈兰色蓝紫色绿色
n2）羰基化合物：银镜反应苯肼苯肼衍生物氨基脲羟胺等反应
n3）饱化合物薁类化合物：溴氯仿溶液红色褪表示油中含饱化合物继续滴加溴氯仿溶液产生兰色紫色绿色反应表明含薁类化合物
n4）酯类化合物：加入亚硝酸铁氰化钠试剂氢氧化钠溶液出现红色逐渐消失表明油中含酯类化合物
4挥发油定量分析
挥发油定性分析常相保留时间进行加峰面积方法作已知化合物定性鉴
n定量分析挥发油化学成分常干化合物沸点接者分异构体时成分未知易标法外标法
n通常法
n挥发油中成分含量高分离度标法外标法进行定量分析
n气 质联方法挥发油研究中已日趋普遍
二．薄层色谱法
（）应特点概况
1．薄层色谱条件选择
挥发油薄层色谱条件根极性加分离油中含类化合物极性序：
n 烃（萜）＜醚＜酯＜醛酮＜醇酚＜酸
n 挥发油薄层色谱硅胶氧化铝薄层外采硝酸银薄层萜类化合物双键数目位置硝酸银形成π络合物难易稳定性差分离硝酸银吸附剂中含量 25宜
2．薄层显色剂
（1）茴香醛 浓硫酸试剂：喷105℃加热挥发油中成分显颜色
（2）异羟肟酸铁试剂：斑点显淡红色酯酯
（3）24 二硝基苯肼试剂：产生荧光斑点表明含醛酮类化合物
（4）三氯化铁试剂：斑点显绿色蓝色酚性化合物
三．定量分析方法
（）挥发油总量测定（蒸馏法）
1．测定重10挥发油
2．测定重10挥发油
5含挥发油常中药分析（学）
肉桂质量分析
第十五章 类化学成分分析
1常氨基酸分析方法
l 薄层色谱常支持剂硅胶展开剂正丁醇 醋酸 水（65：15：20）正丁醇 甲酸 水（75：15：10）乙醇 氨水（4：1）正丁醇 甲酸乙酯 水（2：2：1）
l纸色谱常展开剂：正丁醇 醋酸 乙醇 水（4：1：1：2）甲醇 水 吡啶（80：20：4）正丁醇 12％氨水 乙醇（13：3：3）水饱酚
l采2种溶剂系统进行双层析
l常氨基酸通显色剂：
1）茚三酮试剂：喷110℃加热显色般氨基酸呈紫色氨基酸脯氨酸海草酸显黄色氨气反应应注意避免氨气干扰
2）12 萘醌 4 磺酸（Fo1in试剂）：喷室温干燥氨基酸呈颜色
2总糖定量分析
1)苯酚 硫酸法测定
2) 35 二硝基水杨酸（DNS）法测定
3)蒽酮 硫酸法测定
3．含机酸常中药分析
（）金银花中机酸分析
4环烯醚萜类分析
环烯醚萜苷存栀子鸡矢藤马钱子肉苁蓉等中药中4甲基环烯醚萜甙黄玄参车前等中药成分
裂环烯醚萜（secoirdoid）类成分环烯醚萜开环衍生物类成分龙胆科植物中发现尤龙胆属獐芽菜属植物中存更普遍
定性分析
l该类成分氨基酸加热显深红色蓝色冰醋酸溶液加少量铜盐显蓝色Shear试剂（浓盐酸苯胺1：15混合）反应显颜色
l薄层定性分析硅胶G硅胶GF254薄层板聚酰胺薄膜
l显色剂硫酸乙醇溶液茴香醛试液香草醛硫酸试液二甲
氧基苯甲醛 硫酸溶液
5．环烯醚萜苷常中药分析
（）黄中环烯醚萜苷分析
（二）龙胆中裂环烯醚萜苷分析
6木脂素类分析
木脂素类化合物裸子植物子植物中分布较广存植物木部树脂中
常中药五味子厚朴刺五加细辛含木脂素类成分
7含木脂素常中药分析
（）五味子中木脂素类成分分析
（二）厚朴中木脂素类成分分析
8萜类衍生物分析 含萜类衍生物常中药分析
（）白芍中单萜苷分析
（二）木香中倍半萜酯分析
（三）穿心莲中二萜酯分析
第十六章 动物药分析
1 动物药化学成分分类
（1）蛋白质水解产物
（2）生物碱类
（3）甾类化合物
（4）酮类酸类成分
2胆汁酸结构特征动物界分布
天然胆汁酸胆烷酸衍生物动物胆汁中通常甘氨酸牛磺酸肽键结合成甘氨胆汁酸牛磺胆汁酸钠盐形式存
高等动物胆汁中通常发现胆汁酸含24碳原子胆烷酸衍生物常见胆酸氧胆酸鹅氧胆酸α猪氧胆酸石胆酸等
鱼类两栖类爬行类动物中发现胆汁酸含27碳原子28碳原子类胆汁酸粪甾烷酸羟基衍生物通常牛磺酸相结合存动物胆汁中
3．胆汁酸化学性质
A末端羧基反应
1）成盐：游离胆汁酸类水中溶解度形成盐易溶水胆酸20℃水中溶解度0028％钠盐56％
2）原反应：胆汁酸乙醚中氢化锂铝作者乙醇中金属钠作羟基原C24酸原成相应C24醇
B环羧基乙酰化反应
甾环羟基常法乙酰化乙酰化物容易结晶定熔点利胆汁酸纯化精制
C甾环酮基原反应
胆酸易外胆汁酸资源限度量制备床困难目前般采胆酸作原料加工制备C7位羟基变氧胆酸C12位羧基变鹅氧胆酸C7C12位羟基变石胆酸
4．胆汁酸鉴方法
（1）化学法
1）Penkofer反应：原理蔗糖浓硫酸作生成羟甲基糖醛者胆汁酸结合成紫色物质
2）Gregory Pascoe反应：加45％硫酸03％糠醛胆汁存溶液显蓝色方法胆酸定量分析
（2）薄层色谱法
③ 显色剂：30％硫酸试剂10％磷钼酸乙醇试剂苯甲酸试剂茴香醛试剂三氯化铁试剂三氯化锑试剂重铬酸钾饱80％硫酸试剂等
5牛黄熊胆猪胆粉源化学成分
1．牛黄
牛黄牛科动物牛Bos Taurus domesticus Gmelin胆囊结石少数胆肝结石具清心开窍镇惊豁痰息风解毒功效
牛黄中含较胆汁酸中胆酸（5~11）氧胆酸（约2％）鹅氧胆酸（06~17）盐类含7SMC（Smooth muscle contractor水溶性肽类化合物具收缩滑肌降低血压作）胆红素（bilirubin）钙盐盐胆甾醇种氨基酸种机元素
天然牛黄工牛黄成分
1）天然牛黄 ： 2）工牛黄：
胆红素 胆红素
氧胆酸 猪氧胆酸
胆酸 胆酸
氧胆酸 胆固醇
结合型胆甾酸盐 磷酸三钙
牛黄酸 硫酸镁
胆固醇 硫酸亚铁
粘蛋白 淀粉
氨基酸
肽类脂肪酸
卵磷脂
钙盐机盐
2．熊胆
熊胆熊科动物黑熊Selenarctos thibetanus Cuvier熊Ursus arctos L 干燥胆清热解痉肝明目功效
熊胆化学成分胆汁酸中熊氧胆酸（ursodeoxycholic acid）占部分含鹅氧胆酸（chenodeoxycholic acid）胆酸氧胆酸等胆酸通常牛磺酸甘氨酸结合形成钠钙盐存
熊胆解痉作效成分熊氧胆酸熊胆特成分
3．猪胆粉
猪胆粉猪科动物猪Sus scrofa dommestica Brisson 胆汁干燥品清热润燥解毒止咳喘功效
猪胆中含种胆汁酸类成分成分猪氧胆酸含鹅氧胆酸胆酸等成分
6牛黄定性分析
2) 薄层色谱法
取品粉末10mg加氯仿20ml超声处理30min滤滤液蒸干残渣加乙醇1ml溶解作供试品液取胆酸氧胆酸品加乙醇制成1ml含2mg混合溶液作品液
吸取述溶液2μl分点硅胶G薄层板异辛烷 乙酸乙酯 冰醋酸（15：7：5）展开剂展开取出晾干喷10 硫酸乙醇液105℃加热斑点显色清晰置紫外光灯（365nm）检视供试品色谱中品色谱相应位置显相颜色两荧光斑点
工牛黄定性鉴：
（1）取工牛黄粉末适量分2份1份加硫酸呈污绿色1份加硝酸显红色
（2）工牛黄见光λCHCl3max453nm处吸收
（3）工牛黄天然牛黄IR吸收光谱明显差异
（4）胆红素化学反应：
Van den Bergh反应（重氮化反应）：胆红素重氮化试剂中氨基苯磺酸合成偶氮染料偶氮染料强酸中呈蓝紫色pH20 ~ 55呈红色5呈绿色（500 ~ 560nm）
反应中首先分子断裂胆色素分子中必须中央甲烯基（CH2）存显色（例胆绿素显示反应）
7熊胆定性分析
1)化学法
取胆仁粉末紫外光灯应显黄白色荧光应显棕黄色荧光取粉末约02g溶7％冰醋酸溶液20ml中溶液应显浅蓝色乳浊荧光（牛羊胆区）
2)薄层色谱法
（1）取胆仁约100mg加甲醇10m1温热溶放冷滤滤液浓缩干加20％氢氧化钠溶液5ml水浴水解5h放冷加盐酸pH 2~3乙酸乙酯萃取浓缩约5ml供试取胆酸熊氧胆酸猪氧胆酸鹅氧胆酸氧胆酸品分点硅胶G板异辛烷 乙醚 冰醋酸 正丁醇 水（10：5：5：3：1层）取出晾干喷30％浓硫酸105℃干燥10min供试品应熊氧胆酸相斑点
8麝香质量分析
麝香（moschus）鹿科动物林麝Moschus berezovskii Flerov马麝M sifanicus Przewalski原麝M moschiferus Linnaeus雄体香囊中分泌物具抗炎强心雄性激素样等作
麝香化学成分复杂目前已知：
（1）麝香酮（muscone）
含量约09％~3％天然麝香效成分麝香香味成分特异强烈香气冠心病硝酸甘油样作
（二）定量分析
1．气相色谱法
2．色法
3．高效液相色谱法
9蟾酥质量分析 P481
（）定性分析 1．化学法
（二）定量分析 1．高效液相色谱法
第十七章 矿物药分析
1矿物药特点
（1）相固定化学组成数机化合物
（2）固态具确定晶体结构
（3）岩石种固态矿物组成集合体定物理化学条件相稳定外界条件变化定程度时改变组成新条件稳定化合物
2 第二节矿物药常理化分析方法
矿物药分析般程序：取样 试样分解 定性分析 定量分析
中试样分解测组分转入溶液中重步骤般求：
① 试样分解必须完全
② 试样分解程中测组分应损失
③ 试样分解程中应引入测组分干扰组分
常分解方法：溶解法（湿法）熔融法（干法）两种
1）溶解法：简便分解方法试样溶解水酸溶剂中分解方法通常采水稀酸浓酸混合酸序进行处理溶解法试样完全溶解时采熔融法
2）熔融法：试样固体熔剂混合然高温加热全熔半熔欲测组分转变溶水酸中化合物熔剂分碱性熔剂（碳酸钠氢氧化钠）酸性熔剂（硫酸氢钾焦硫酸钾）氧化性熔剂（氧化钠碳酸钠加硝酸钾）原性熔剂（碳酸钠加硫）等根矿物药性质加选
．容量法
1)配位滴定法测定含钙铝等矿物药标准溶液乙二胺四醋酸二钠液直接滴定石膏钟乳石紫石英加量乙二胺四醋酸二钠溶液锌液回滴白矾
2）pH值控制
EDTA滴定中pH值非常重种金属离子低pH值求低pH值配合物稳定
定pH值范围种离子间相互干扰利控制pH值方法溶剂中连续滴定种离子
EDTA滴定常指示剂pH7时二甲基橙pH7时铬黑T铬黑蓝R紫脲酸胺
3） 掩蔽剂
消离子间干扰述控制pH方法外常掩蔽剂掩蔽剂分两种形式：
① 利配位反应降低干扰离子浓度消干扰方法称配位掩蔽法
② 利产生沉淀掩蔽方法称沉淀掩蔽法
二．重量法
1 沉淀求：
（1）测组分沉淀完全形成沉淀溶解度沉淀剂选择恰量产生离子效应促沉淀完全般超20％ ~ 50％宜时产生配合反应沉淀溶解度加
（2）沉淀纯净避免沉淀
沉淀源：
① 表面吸附沉淀颗粒越表面吸附越
② 吸留沉淀速度快杂质包入中
③ 沉淀指放置程中物质沉淀
提高沉淀纯度应易吸附物质浓度降低反复洗涤沉淀沉淀粒子加
（3）求沉淀颗粒易洗涤滤
2 加颗粒办法：
① 减少沉淀物质浓度稀溶液中慢慢加入沉淀剂断搅拌防止局部浓度
②增加沉淀程中沉淀溶解度热溶液中进行沉淀
③陈化放段时间
3第三节 常矿物药质量分析
朱砂质量分析 P504
二．雄黄质量分析 P505
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第章 绪
1 中药分析学定义：中药分析（Analysis Science of Chinese Materia Medica）利物理化学物理化学生物学药理学生物化学相关方法技术研究分析中药（天然药物）中药制剂关联产品质量门科学称天然药物分析（Analysis of Natural Medicinal Products or Analysis of Crude Drugs）生药分析（Pharmacognostical Analysis）
2 定量分析常强调分析中药效成分通常具生物活性医疗作化学成分者称效成分成分生物碱类黄酮苷类蒽苷类强心苷类皂苷类挥发油类香豆素类鞣质类糖氨基酸等中药中生物活性显著成分者称辅成分树脂色素机盐等种区分相外谓效完全代表中药疗效
3 生产线分析 中药制剂生产全程环节（原料药材检测原药材切制粉碎炮制提取滤浓缩制剂中间体制备辅料质量成型工艺程终制剂成品）质量监测时反馈质量信息指导生产发现问题时解决确保产品质量种生产环节中进行适时检测称生产线分析已逐步受厂家药品质量理部门重视
4 GAP（中药材生产质量理规范Good Agricultural Practice）
GLP（药品非床研究质量理规范Good Laboratory Practice
for Nonclinical Laboratory Studies）
GMP（药品生产质量理规范Good Manufacturing Practice for Drugs）
5 研究目标务
A着重强调中药制剂中含效成分化学成分研究
B着重强调定量分析研究
C着重强调现代分析方法应
D着重强调学科手段中药综合分析研究
6 中国药典国家保证药品质量制订法典药品生产营检验监督理部门遵循法定国医药行业外贸易技术交流缺少准绳1953年起出版9版药典
7．取样
药材取样法：取样基原理应均匀合理采四等分法反复数次直剩余量足够试验止均样品量均样品量般少实验需3倍1／3供实验分析13供复核13留样保存保存期少年
8 供试品提取
（1）溶剂提取法
中药中化学成分溶剂中溶解度溶剂性质关般遵循相似相溶原通测成分结构分析选合适溶剂
常提取溶剂
（a）极性溶剂：水典型极性溶剂溶解离子型成分生物碱盐机酸盐成分
（b）非极性溶剂：石油醚乙醚氯仿乙酸乙酯等常非极性溶剂提取低极性成分
（c）中等极性溶剂：乙醇甲醇丙酮等常中等极性溶剂中药类成分具较广泛溶解性
乙醇常提取溶剂
（2）常提取方法
A 冷浸法：浸泡时间12~24（~48）h浸泡期间应注意常振摇浸泡称重冷浸法优点适宜遇热稳定效成分操作简便应较广
B 连续回流法：样品置索氏提取器中利遇热挥发溶剂进行反复回流提取法提取效率高需溶剂少遇热易破坏欲测定成分宜法
C超声波提取法：样品置适宜容器加入提取溶剂置超声波振荡器中进行提取法提取效率高实验证明般样品30min完成
外测成分提取完全中药材粉碎度定求提取方法时间温度等选择通实验数加确定
9含量测定
（1）效成分含量测定
效成分明确中药中成药应进行效成分含量测定确保质量
（2）效部位含量测定
某中药中成药致明确活性物质类成分进行效部位测定总生物碱总皂苷总黄酮等测定效部位总量
（3）效成分明确中药中成药测定
A选择认效成分成分（指示性成分）进行测定
B测定药物总固体量水浸出物量醇浸出物量乙醚浸出物量间接控制质量
C加工炮制制备贮藏程中易损失破坏成分进行含量限量检查
D选适生物效价生物化学方法控制质量
(4)贵重药材含剧毒成分中药测定
A中药制剂中含剧毒成分需测定含量乌头斑蝥等
B贵重药材制剂中投料量应加测定参麝香等
第三章 光谱分析法应
1 200~400 nm 紫外区 400~800 nm 见光区
2 光谱分析法定义分类
利种化学物质（包括原子基团分子高分子化合物）具发射吸收散射光谱系特征确定性质结构含量方法称光谱分析法根光谱谱系特征光谱分析方法分发射光谱分析吸收光谱分析散射光谱分析三类
（1）应吸收光谱原理进行分析：见紫外分光光度法红外分光光度法原子吸收分光光度法
（2）应发射光谱原理进行分析：荧光分析法火焰光度法
（3）应散射光谱原理进行分析：浊法包括免疫浊法等
紫外分光光度法
3 实例1双波长光谱法测定喉痛消盐丸中靛蓝靛玉红含量
青黛该丸剂中药物青黛中效成分靛蓝靛玉红丸剂中含量作喉痛消炎丸质量标准重指标利等吸收波长法进行含量测定样品需预先分离直接测定
A 选择等吸收波长：
图知靛蓝540nm6344nm处合适等吸收波长靛玉红5142nm566nm处等吸收波长空白样品述波长处吸收曲线成条直线干扰测定选靛蓝测定波长λS1566nm参波长λR15142nm选靛玉红测定波长λS2540nm参波长λR26344nm
B标准曲线绘制
精密称取靛蓝品溶液（1ml氯仿含40μg靛蓝）025050…20ml靛玉红品溶液（1ml氯仿含10μg靛玉红）0204…140ml分放入10ml量瓶中氯仿稀释刻度分述等吸收波长处测差吸收度：
ΔA1A566nmA5142nmΔA2A540nmA6344nm
然ΔAC做标准曲线求出元回方程：
ΔA1002241×C1 （r110000）
ΔA2004060×C2+00055 （r210000）
式中C1 C2分靛蓝靛玉红浓度（μgml）
C含量测定
精密称取喉痛消炎丸细粉约02g索氏提取器中氯仿提取兰色（4时）氯仿定容50ml量瓶中精密吸取5ml述溶液10ml容量瓶中加氯仿刻度样品溶液样品溶液λS1λR1处测定ΔA样1值ΔA1式求出靛蓝浓度样品中靛蓝含量样λS2λR2处测定ΔA样2值ΔA2式求出靛玉红浓度样品中靛玉红含量
4实例2差示光谱法测定含牛黄中成药中胆红素含量
胆红素中药牛黄重部分天然牛黄中胆红素含量高达40~50牛黄类中成药达百余种测定胆红素含量控制类中药质量必
A 测定原理
胆红素具高轭体系结构吸收光谱波长453nm处吸收见光射胆红素易氧化成兰色产物453nm处吸收度明显降低图
a：光前b：光
B含胆红素中药制剂般含数种波长453nm处吸收组分直接色法测定胆红素含量易受组分影响时利存组分选定光条件吸收光谱光前保持变性质差示光谱法胆红素进行定量
通实验知浓度胆红素品溶液日光射25分钟红外灯（250W）射33时吸收度稳定实验时选日光射30分钟红外灯射4时测ΔA值
C标准曲线绘制
精密称取胆红素2mg50ml棕色量瓶中加入适量冷（10℃）酸性氯仿溶液（150ml氯仿中含005ml浓盐酸）冰水浴中超声振荡20min稀释刻度制成储备液精确吸取0408121620ml储备液510ml量瓶中加冷酸性氯仿刻度测光前453nm处吸收度吸收度差值ΔA胆红素溶液浓度C（ugml）回方程ΔA00804C+000570（r09995）（光反应外余操作需避光）
D干扰性实验
分制六应丸六神丸牛黄消炎丸空白样品液453nm处测光前A值计算ΔA值实验表明三种成药空白溶液ΔA值零零说明干扰组分光条件干扰胆红素测定
E含量测定
精密称取六应丸六神丸60mg 牛黄消炎丸120mg 置10ml 带塞试中准确加入冷酸性氯仿10ml 冰水浴中振荡20min 滤弃初滤液测续滤液光前A 值算出ΔA 值回方程算出样品含量测定3 批述3 种制剂中胆红素含量含量次0829~115 0592~0999 0487~0645mgg
二．红外分析法
4 常25μm ~ 25μm中红外区
5定量分析
红外光谱定量分析通特征吸收谱带强度测量求出组份含量理LambertBeer定律红外光谱谱带较测定波长选择余方便单组份组份进行定量分析
外该法受样品状态限制定量测定气体液体固体样品红外光谱定量分析应广泛
红外光谱定量灵敏度较低尚适微量组份测定
三荧光分析法
6法优点灵敏度更高（<104μgml）选择性试样量少等特点特适体中药分析
7足处干扰素实验条件严格
8荧光分子结构关系
π电子轭程度越高更易产生荧光
（1）刚性面结构(分子刚性增加荧光增强)
（2）取代基（供电子基团常荧光增强吸电子基团荧光减弱）
（3）饱稠环结构（利荧光发射）
（4）分子处环境
第四章 色谱分析法应
1 色谱法（Chromatography）种物理物理化学分离分析方法形成气相色谱液相色谱薄层色谱离子色谱亲色谱超界流体色谱毛细电泳电色谱等分支种色谱仪器质谱红外核磁等技术联创立复杂混合物分析新手段成发展快应广分析方法
2分离原理利物质流动相固定相两相中分配系数差异吸附解吸差异差异分离
3．分离原理分类
（1）吸附色谱法（adsorption chromatography）利吸附剂表面组分物理吸附性差分离色谱法称吸附色谱法吸附色谱GSCLSC等
（2）分配色谱法（partition chromatography）利固定液组分分配性差异分离色谱法称分配色谱法分配色谱法GLCLLC等
（3）离子交换色谱法（ion exchange chromatographyIEC） 离子交换树脂作固定相利树脂离子交换基团样品离子交换力差分离色谱法称离子交换色谱法
（4）尺寸排阻色谱法（size exclusion chromatographySEC） 孔凝胶作固定相利凝胶孔穴尺寸分子排阻效应差分离色谱法称尺寸排阻色谱法
（5）亲色谱法（affinity chromatography）具生物活性配位基（抗体酶等）键合非活性载体基质表面构成固定相利生物分子固定相表面配位基专属亲力分离色谱法称亲色谱法
（6）毛细电泳法（capillary electrophoresisCE）样品毛细液体介质中电场力作分离分析方法称毛细电泳法
（7）毛细电色谱法（capillary electro chromatographyCEC）分离机制色谱电场两种作力样品组分分配系数电泳速度差分离色谱法称毛细电色谱法
4吸附剂应具备条件
（1）逆吸附分离物质
（2）会引起吸附物质化学变化
（3）吸附剂粒度适洗脱剂定速率流出（5~6mlmin）
5常吸附剂种类
（1）硅胶（2）氧化铝（3）孔树脂（4）硅藻土
（5）Sephadex LH 20（6）C18C8
6 薄层色谱优点：
（1）设备简单
（2）展开时间短
（3）分离效果
（4）显色方便喷洒腐蚀性显色剂加热等
（5）灵敏度高
7薄层色谱法分离机理分类五种形式
（1）吸附薄层色谱常硅胶硅藻土氧化铝吸附剂
（2）分配薄层色谱常纤维素硅藻土硅胶载体载体吸附定量水溶剂（缓液酸溶液甲酰胺丙二醇等）固定相固定相相混溶（部分混溶）展开剂作流动相
（3）离子交换薄层色谱：离子交换剂制作薄层
（4）排阻薄层色谱：葡聚糖凝胶制作薄层展开剂流薄层时混合组分分子葡聚糖凝胶薄层反复进行扩散排阻混合物达分离
（5）亲色谱
8 应广泛吸附薄层色谱利吸附程两规律： （1）吸附逆吸附解吸附处动态衡中
（2）吸附剂物质吸附行差异
9 吸附剂选择
薄层色谱中吸附剂展开剂选择色谱分离否获成功关键
A硅胶略带酸性适分离酸性中性物质商品硅胶分两类：硅胶H（加石膏）硅胶G（加石膏）
B氧化铝略带碱性适分离碱性中性物质
C聚酰胺分离黄酮类成分
10 吸附剂活化通定温度烘烤颗粒中水分
11选择展开剂两原：
（1）展开剂分离物质应定解吸力太般展开剂极性应分离物质极性略
（2）展开剂应分离物质定溶解度分离物质溶解展开剂中展开剂前移动
12 薄层扫描法
（）测定原理
薄层扫描仪单色光透薄层板斑点时部分单色光斑点吸收透射光强度减弱通直接测量透射光强度测定方法称透射法
单色光薄层板斑点表面反射出时部分单色光斑点吸收反射光强度减弱通直接测量反射光强度测定方法称反射法
利两束波长单色光λS λR交射位置测定吸收值差△A计算样品含量方法称双波长测定法
（二）光源选择
A 见光 薄层展开斑点身颜色喷显色剂斑点显色斑点吸收曲线见光区钨灯光源
B紫外光 薄层斑点中物质紫外光吸收紫外光扫描样显色避免显色引起误差方法简便灵敏度高适反射法
值注意化合物斑点薄层 λmax溶液中氘灯光源
C荧光 利紫外光物质激发产生荧光强弱测定化合物含量般高压汞灯氙灯光源
13 新技术介绍：高压高效板色谱
OPLC结合TLCHPLC 优点创新板柱代HPLC色谱柱应程中分析够样品制备样品高压恒定流速元配展开剂情况快速展开保证极高板效率达分离效果意时间中断展开程观察展开效果影响进步展开OPLC板柱物质高压密闭环境线性展开分离物质会出现规扩散受外界温度湿度影响
第五章 气相色谱分析
1气相色谱法（Gas ChromatographyGC）气体流动相色谱方法气相色谱程分离样品（组分）种惰性气体（载气）携带通层析柱（色谱柱）样品中混合组分载气固定液间分配固定液根样品分配系数选择加阻滞直载气中形成分离谱带止谱带载气流出色谱柱先次序检测器检测器载气中组分浓度变化转变相应电讯号作时间函数记录仪峰形式记录色谱图
2 评价柱效选择操作条件气相色谱两基理：塔板理速率理
速率理指出色谱柱填充均匀程度填充物粒度流动相种类流速固定相液膜厚度柱效峰宽影响色谱分离操作条件选择提供理指导
3 操作温度确定
（1）柱温选择应根样品沸点固定液配进样量检测器灵敏度综合考虑
气相色谱操作温度较宽196~450℃
实际应中考虑固定液低高温度高操作温度应选择固定液沸点约低150~200℃规定高温度低50~100℃
（2）分配系数柱温关系般情况较低柱温改善分离
柱温选择基原：难分离组分分离度前提采较低柱温
柱温沸点间关系见书
4GC 检测器类型 热导检测器 (TCD)氢火焰离子化检测器 (FID)
检测器
样品类型
灵敏度范围
FID
碳氢化合物
10100 pg
TCD
载气外物质
5 100 ng
ECD
机卤化物氯化溶剂农残
0051 pg
NPD
机氮化合物机磷化合物
0110 pg
检测器总求类型样品浓度范围操作条件够达响应快灵敏度高敏感性稳定性线性范围宽目作检测器质量指标
5热导检测器 (TCD) 氢火焰离子化检测器 (FID)
TCD 非破坏性浓度型检测器
FID 破坏性质量型检测器火焰中生成量碳正离子收集计算形成检测器信号
FID没响应物质 稀气体氮氧化物卤化硅H2O杂环化合物
第六章：高效液相色谱
1流动相应该：
HPLC 级
滤 (045 um 02 um)
脱气尤低流速时
相溶
2溶剂滤： 干净溶剂溶剂瓶中长菌溶剂会阻塞溶剂滤器降低泵操作性遵列建议提高性延长溶剂滤器寿命：
菌溶剂瓶避免溶剂长菌
滤膜滤溶剂微生物
两天更换滤溶剂
避免溶剂瓶直接日
3正确进样方式
1)进样量：定量环体积半满刻度进样（需推进3~5倍量进样环体积样品样进样准确）
2)进样动作：Load状态推针动作缓防样品出进样先切换Inject状态拔针防倒吸产生气泡
3)清洗：Inject状态清洗
4)废液出口末端应进样口水防样品倒流产生虹吸
4光电二极阵列检测器（DAD）
80年代出现种光学通道检测器晶体硅紧密排列系列光电二极二极越分辨率越高般二极应接受光谱纳米谱带宽单色光
二极阵列检测器工作原理复光通流动池时组分选择性吸收进入单色器射二极阵列装置纳米波长光强变成相应电信号强度通计算机处理获三维光谱—色谱图吸收光谱组分定性色谱峰定量中药成分研究中广泛应
5 蒸发光散射检测器
蒸发光散射检测器（evaporative lightscatter detector ELSD）90年代通型检测器种物质时响应利定条件粒子数量变光散射强度正溶质决定粒子进行测量：样品结构需具备紫外发色团合适折射率梯度洗脱流动相系统温度变化敏感种物质响应子次分析中时检测成分杂质等
工作原理：色谱柱流出液引入雾化器通入气体混合形成均匀微液滴加热漂移蒸发流动相样品组分形成气溶胶然进入检测器强光激光射气溶胶产生光散射光电二极检测散射光灵敏度较低尤低紫外吸收组分外流动相必须挥发性含缓盐类
6分离度 反映相邻两峰分开程度应合适范围太两峰未彻底分离太分离时间长R15基线分离
7提高分离度：
1)通述方法增加保留时间：
选择合适分离参数增加固定相浓度增加色谱柱长度
2)通述方法降低谱带宽度：
均载体 仔细填充柱子 选择粒度载体
优化流速 减进样量 降低系统死体积
降低输出回路响应时间
8 超界流体色谱 supercritical fluid chromatographySFC
超界流体做流动相流动相溶剂化力进行分离分析色谱程20世纪80年代发展完善起种新技术超界流体物质高界压力界温度时种状态具气体液体某性质具气体低粘度液体高密度介气液间较高扩散系数等特征SFCGCLC补充 SFC解决气液色谱分析难题分析气相色谱难汽化挥发性样品时具高效液相色谱更高效率分析时间更短
超界流体色谱兼气相色谱液相色谱特点分析气相色谱适应高沸点低挥发性样品高效液相色谱更快分析速度条件操作温度决定选流体常二氧化碳氧化亚氮超界流体容易控制调节进入检测器前转化气体液体保持超界流体状态现液相气相检测器相连接种类型检测器相匹配扩应范围分类力定性定量方面较选择范围种梯度技术优化色谱条件高效液相色谱法易达更高柱效率
9高效毛细电泳法
high performance capillary electrophoresis HPCE）
毛细电泳特点：
毛细电泳突出优势概括三高二少高灵敏度高分辨率高速度进样少溶剂量少等
10液相色谱—质谱联常质量分析器
四极质谱仪 (quadrupole mass spectrometer Q)
三级串联四极质谱仪（triplestage quadrupole mass spectrometer TQMSQQQ）
飞行时间质谱仪 (timeofflight mass sectrometer TOF MS)
离子阱质谱仪（ion trap mass spectgrometer IT MS)
第八章 体中药分析药代动力学研究
1体中药分析测定指药物（中药制剂）吸收进入体循环相数量出现相速率代谢物测定
体药物测定真正反映药物利情况通常称体生物利度测定
体生物利度测定方法受试者药定时测定体液（血尿唾液等）中药物浓度药理效应强度
2 生物利度评价方法分类
生物利度研究方法血药浓度法尿药数法药理效应法等研究方法选择取决研究目测定药物分析方法药物药代动力学性质
3．生物样中药物浓度分析方法
生物利度研究中样品取样量少药物浓度低源性物质存干扰求分析方法专属性强准确性高精密灵敏样品中测定原型药物活性代谢产物常色谱法测定测物质代谢产物源性物质分离度达求
（1）专属性（specificity）：方法特异性必须证明测定物质原形药物特定代谢产物源性物质相应代谢产物干扰样品分析
（2）标准曲线：标准曲线应覆盖测样品全部浓度范围58浓度制备高浓度低浓度测定均达求精密度准确度
（3）准确性（accuracy）：准确性指测样品浓度真实浓度接程度准确性回收率表示般70115％范围考察测定方法准确性应空白生物样品中加入已知量药物成高中低三浓度浓度重复5次测定
（4）精密度（precision）：方法精密度日日间相标准差（RSD）表示考察精密度少选择三浓度进行低浓度选择定量检测限附高浓度选择标准曲线限附浓度重复5样品RSD应15％定量检测限附放宽20％
（5）灵敏度（sensitivity）：检测灵敏度通较已知低浓度测试药物样品空白样品测定信号确定检测低浓度检验低浓度信号空白样品信噪3121时定检测灵敏度
（6）定量检测限（limit of quantitaion）：表示检测符合准确度精密度求低药物浓度应该少测定35半衰期时样品中药物浓度l10l20Cmax浓度
（7）样品稳定性：生物利度研究测定样品常需贮存测需考察样品室温冰冻冻融等贮存条件时间稳定性影响
4中药化学成分体代谢
（）中药成分肠菌生物转化
肠菌中药成分结构进行生物转化现研究成果肠进行生物转化反应类型叙述：
1）水解反应 2）氧化反应 3）原反应4）异构化反应
5）含氧化合物含氮化合物转化
（二）中药成分肝脏代谢反应
氧化原水解反应称药物代谢第相（phase I ）反应结合反应称药物代谢第二相（phase II） 反应药物结合反应指具羟基羧基氨基等官团药物作生物体成分糖硫酸盐氨基酸等结合具官团药物需氧化原水解等转化产生官团生物体成分结合排出体外
1）药物代谢氧化反应
氧化反应药物代谢中常见重反应部分氧化反应肝脏微粒体单加氧酶末端酶系细胞色素P450催化
4）药物代谢结合反应
药物代谢结合反应药物第相氧化原水解等生物转化代谢物进入第二相生物源性分子葡萄糖醛酸硫酸盐磷酸盐甘氨酸氨基酸硫氰酸盐结合乙酰化甲基化等生成水溶性药理作产物尿液胆汁排泄
5 药物代谢作特殊条件机化学反应定特点纳：（略P257）
（1）氧化反应 （2）反应底物种类（3）代谢物水溶性增加（4）药物转化样性（5）药物代谢种素作结果：
6．生物体检测样品选择
（1）血液：采血部位动物异兔常取耳静脉血狗宜取胰静脉血取血量12ml必时体做实验注意试验前二周受试者药物饮酒尤服诱导抑制酶作药物
血浆血清常采血样般全血全血中加入肝素抗凝剂离心血浆血浆纤维蛋白血清血浆分离应快进行分析般超24时分离放置冰箱中冰冻保存
血样取提取净化分离进行效分析测定
净化分离时首先蛋白质蛋白质方法：
A加机溶剂中性盐蛋白质脱水沉淀
B利酸性沉淀重金属离子蛋白质形成溶性沉淀
C加热蛋白质变性超滤透析方法蛋白质葡萄糖凝胶（Sephadax系列）分离生物制品时极常分亲水型疏水型离子交换型
（2）尿液
1） 尿样取采冰箱冷藏室温效应加入防腐剂（甲苯氯仿等）抑制细菌生长
2）样品制备时注意蛋白质
3）尿液中测成分代谢产物常葡萄糖醛酸硫酸酯类结合缀合水解方法进行处理水解方法酸水解酶水解酸水解通常机酸盐酸等酶水解β葡萄糖醛酸酶芳基硫酸酯酶等
7采体分析方法研究中药药代动力学关键建立合适体微量检测方法该方法应满足求：
（1）灵敏度高检出微量痕量中药效成分
（2）专属性强排中药效成分代谢产物机体源性物质干扰
（3）准确度高精密度高
（4）够快速准确报告测**果
（5）操作简单费低廉
第九章 生物碱分析
1生物碱类型
异喹啉衍生物类 黄连罂粟吐根 锡生藤延胡索防已石蒜
吲哚衍生物类： 番木鳖毒扁豆 麦角萝芙木
莨菪烷衍生物类：古柯颠茄洋金花
2酸碱性
胺类碱性强弱取代氢烃基种类数量关
1）氨分子中氢原子脂肪烃基取代脂肪烃基斥电子基取代氮原子周围电子云密度增电负性增强吸引质子力加碱性加强强度：
叔胺 ＞ 仲胺 ＞ 伯胺 ＞ 氨
2）季胺碱离子形式存碱性更强
3）N原子酰胺形式存时碱性消失
3．溶解度
游离生物碱极性较溶乙醇氯仿丙酮乙醚等机溶剂溶难溶水
生物碱盐类极性较尤机酸盐分子机酸盐易离子化生成带正电荷生物碱阳离子溶难溶苯氯仿乙醚等
生物碱盐类性质点相反种性质生物碱提取分离精制
生物碱机酸盐易溶水溶解度区般含氧酸硫酸磷酸等盐水溶度较少数化合物盐酸盐氢碘酸盐难溶水（盐酸檗碱）
4．常生物碱试剂：
碘碘化钾（Wagner试剂）碘化铋钾（Dragendorff试剂）碘化汞钾（Mayer试剂）硅钨酸（Bertrand试剂）等
5生物碱试样提取
生物碱溶氯仿甲醇乙醇等机溶剂季胺碱分子量较低含极性基团较生物碱外般均溶难溶水生物碱酸结合成盐时易溶水醇基种特性溶剂生物碱中药中提出
6生物碱试样精制
1）萃取法 利游离生物碱盐溶解度差达精制目
2）色谱法
3）离子方法
4）超界流体萃取法
该法操作简单快速萃取效果索氏提取法相媲美样品提取完全萃取液滤直接进样分析稳定成分测定更显优越性
7化学薄层色谱定性分析
（）化学定性分析
1）沉淀反应： 中药样品细粉水稀酸溶液温浸滤液滴加列沉淀试剂应3种试剂显阳性反应
氨基酸蛋白质条件常干扰必时通薄层分离滤液碱化氯仿乙醚提取提取物溶稀酸溶液进步实验应显阳性反应
2）常沉淀试剂
（1）碘化汞钾试剂（Mayer）生成白色黄色沉淀
（2）碘化铋钾试剂（Dragendorff）生成橙色沉淀
（3）碘碘化钾试剂（Wagner）生成褐色暗褐色沉淀
（4）磷钼酸试剂（Sonnenschein）酸性溶液中生成白色黄色沉淀加入氨水变成蓝色
（5）苦味酸试剂（Mager）微酸性溶液中生成黄色沉淀
（6）雷氏铵盐试剂（Ammonium reineckate）酸性溶液稀醇液中生成红色定性沉淀
（二）薄层色谱定性分析
1）常生物碱展开系统：
（1）甲苯乙酸乙酯二乙胺（7：2：1）：适种生药中生物碱分离初筛
（2）乙酸乙酯甲酸水（100：135：10）：适水溶性生物碱
（3）氯仿二乙胺（9：1）氯仿甲醇（9：1氨蒸气饱）氯仿甲醇氨水（5：06：6d）：适叔胺碱
（4）正丁醇冰醋酸水（7：1：2）：适季胺碱
2）吸附剂
吸附剂身酸碱性影响生物碱分离
硅胶身略带酸性生物碱吸附力较强中性溶剂展开时Rf值时斑点出现拖尾碱性展开剂．集中斑点硅胶吸附剂分离生物碱时中性展开剂中加入少量碱二乙胺氢氧化铵等
涂铺硅胶薄层时稀碱溶液成碱性硅胶薄层中性展开剂分离生物碱
碱性氧化铝身带碱性中性展开剂生物碱分离
3）显色剂
碘化铋钾试剂通生物碱显色剂植物中非生物碱物质蛋白质氨基酸某苷糖嘌呤甲基化胺鞣质铵盐等特具轭羰基（酮酸）酯非含氮物质香豆素黄酮查耳酮强心苷产生正反应误认生物碱干扰检出产生假阳性反应杂质须净化生物碱方法
8 生物碱定量分析
．色法
（）酸性染料色法
法测定条件：
（1）介质pH关键
（2）酸性染料种类
（3）机溶剂选择
二．薄层色谱法
三．高效液相色谱法
（1）离子交换 HPLC
（2）反相HPLC
改善分离效果方法：
1） 采封端固定相（游离硅醇基越少越）
2）碱性流动相 减少生物碱反相固定相拖尾碱性流动相化学键合相稳定性限制流动相pH值超8
克服HPLC拖尾现象通常流动相中加入碱称离子抑制剂生物碱HPLC分析中碳酸铵醋酸钠磷酸钠均常离子抑制剂离子反相色谱生物碱分离方面应已证明非常成功允许生物碱分离酸性条件进行避免碱性化合物酸性硅醇基化学吸附问题
流动相中加入低浓度长链铵分析碱性化合物色谱峰变完美
3） 流动相中加入缓液改善分离效果磷酸盐缓液醋酸盐缓液等
（3）离子HPLC
（4）正相色谱
硅胶弱酸性硅醇基存避免化学吸附造成拖尾常常溶剂中加入碱性改善剂氨二乙胺三乙胺类似TLC分析系统碱性条件硅胶G稳定性较差硅胶G溶解速度碱性改善剂机溶剂性质关样限制硅胶G作固定相HPLC分析生物碱方面应某溶剂系统言柱寿命极短甚天
9含生物碱常中药分析
黄连质量分析 (P306)
三．延胡索质量分析 (P310)
第十章 皂苷分析
1甾体皂苷结构特征分布
1)甾体皂苷元数轭系统紫外区明显吸收峰浓硫酸作220600nm范围出现吸收峰作甾体皂苷定性定量分析
2)甾体皂苷类成分部分集中单子叶植物百合科薯蓣科龙舌兰科延龄草科菝契科（二科分类系统中广义百合科中）双子叶植物仅少数种属中分布
含甾体皂苷常中药穿山龙绵萆薢粉萆薢重楼土茯苓知母麦冬天冬等
2三萜皂苷植物界较广泛分布
中双子叶植物分布较普遍含三萜皂苷植物较科五加科伞形科夹竹桃科萝藦科菊科石竹科葫芦科戟科豆科桃金娘科远志科毛茛科蔷薇科茜草科等
许常中药含三萜皂苷参三七甘草榆款冬花酸枣仁紫菀桔梗柴胡远志黄芪威灵仙商陆白头翁等
3．常皂苷显色反应 P319
（1）醋酐 硫酸反应（LibermannBurchard反应）
（2）三氯醋酸反应（RosenHeimer反应）
（3）氯仿 浓硫酸反应（Salkowski反应）
（4）冰醋酸乙酰氯反应（Tschugaefb反应）
（5）五氯化锑反应（Kahlenberg反应）
（6）苯肼反应
（7）芳香醛硫酸高氯酸反应
4皂苷定性分析
化学定性分析
（）显色反应
皂苷类化合物常见显色反应：醋酐 硫酸反应三氯醋酸反应氯仿 浓硫酸反应冰醋酸 乙酰氯反应苯肼反应芳香醛 硫酸高氯酸反应等
（二）泡沫反应
取含皂苷类成分中药粉末1g加水10m1煮沸10min滤滤液试强烈振摇产生持久性泡沫（15min）阳性反应
5皂苷定量分析
薄层色谱法
()薄层条件
1．吸附剂
皂苷进行薄层色谱分析吸附剂硅胶氧化铝时分离需加入定硝酸银
硝酸银处理硅胶（氧化铝）薄层具相似极性分子中带数目双键双键位置化合物够开
2．展开剂
皂苷极性较般分配薄层效果较亲水性强皂苷般求硅胶吸附活性较弱展开剂极性较效果
常溶剂系统：氯仿 甲醇 水（65：35：10层）正丁醇 醋酸 水（4：1：5层）等
3．显色剂
薄层色谱时皂苷常显色剂三氯醋酸氯磺酸 醋酸浓硫酸5020硫酸三氯化锑磷钼酸浓硫酸 醋酸酐碘蒸气等显色剂应优缺点
（1）25磷钼酸乙醇溶液
（2）硫酸 甲醇（1：1）
（3）氯磺酸 醋酸（1：2）溶液
（4）碘蒸气
二．色法
皂苷类成分加入适显色剂呈色见光区进行测定种测定方法测定样品中总皂苷总皂苷元含量
皂苷类成分显色反应专属性般较差反应较灵敏方法简便易行
显色剂强氧化性强酸试剂皂苷强酸试剂发生氧化脱水脱羧缩合等系列化学反应生成具烯键结构缩合物显色
常显色剂浓硫酸高氯酸醋酐 硫酸芳香醛 硫酸等
三．高效液相色谱法
现蒸发光散射检测器（ELSD）应皂苷类成分分析更便利ELSD种通型检测器流动相热气流热气化喷雾进入加热溶剂挥发分析检测物质颗粒通狭窄光束散射光光电倍增收集ELSD响应取决分析物质颗粒数量ELSD仅挥发分析物质产生响应梯度洗脱时提供稳基线
6含皂苷常中药分析
．参质量分析 P333
二．甘草质量分析 P336
三．黄芪质量分析 P338
四．重楼质量分析 P340
第十章 黄酮分析
1结构类型分布
1)黄酮类成分基母核认2苯基色原酮
具C6C3C6结构成分广义称黄酮类成分
2)黄酮类成分然界分布规律纳 P344
2 颜色
黄酮类成分颜色分子中否存交叉轭体系助色团数目取代基位置关
色原酮色吡酮环第2位引入苯基形成色原酮芳香环轭体系构成生色团基结构数黄酮类成分呈黄色
黄酮类成分颜色轭体系增加助色团（OHOCH3等）数量增加深
黄酮黄酮醇查耳酮橙酮显典型黄色
醇羟基数目结合位置显色较影响
1）OH数目越显色越深
2）色原酮苯环（A环）OH（57位）显色影响
3）位B环OH（3`4`位）显色影响显深黄色
4）3位OH（黄酮醇）黄酮呈灰黄色
5）C2 C3单键时AB环轭体系（二氢黄酮二氢黄酮醇）呈色异黄酮轭较少呈微黄色色
6）花青素苷颜色pH异般酸性条件呈红色pH8左右呈紫色碱性条件（pH11）呈蓝色
3 酸碱性
（1）1位氧原子具未电子呈弱碱性强酸成盐
（2）分子中具酚羟基具弱酸性强碱形成水溶性盐性质常黄酮类化合物分离
4显色反应
1）金属离子络合
铝盐：常试剂1三氯化铝硝酸铝溶液生成络合物黄色荧光
锆盐：2二氯氧化锆甲醇液生成黄色络合物
铅盐：常1醋酸铅碱式醋酸铅水溶液生成黄红色沉淀
镁盐：常醋酸镁甲醇液二氢黄酮二氢黄酮醇类显天蓝色荧光黄酮黄酮醇异黄酮类等显黄—橙黄褐色
2)原反应
（1）盐酸 镁粉反应 检查黄酮黄酮醇二氢化合物
（2）盐酸 锌粉反应 检查二氢黄酮醇
（3）钠汞齐反应 检查黄酮
（4）四氢硼钠（钾）反应 检查二氢黄酮醇
3)显色反应
（1）酚羟基显色反应（2）碱性溶剂反应
（3）浓硫酸反应 （4）硼酸反应
5紫外吸收 黄酮类成分两较强吸收峰：
第1吸收峰位300400nm称Ⅰ带B环桂皮酰基引起
第2吸收峰位240285nm称Ⅱ带A环苯甲酰基引起
类型黄酮吸收（nm）
1）黄酮 I带：304350II带：250270
2）黄酮醇 I ：358385 II ：250270
3）二氢黄酮I：310330（吸收弱）II ：275290
4）异黄酮 I：吸收 II：250270
5）查耳酮 I：360390 II：240260（吸收弱）
6位移问题位移试剂：
常位移试剂三氯化铝醋酸钠甲醇钠硼酸硼酸钠黄酮类成分吸收选择性灵敏度提高消杂质干扰利含量测定
7黄酮定性分析
化学定性分析
1．盐酸 镁粉反应
（1）槐花鉴 取槐花粉末01g加乙醇10ml加热5min滤取滤液1ml加镁粉少量盐酸23滴显樱红色
2．四氢硼钾反应
3 三氯化铝反应
野菊花鉴：取野菊花粉末3g加乙醇40ml加热回流1h滤取滤液1滴点滤纸喷洒三氯化铝试液晾干置紫外光灯（365nm）观察显黄绿色荧光
二色谱定性分析
黄酮类成分薄层定性般采吸附薄层常吸附剂硅胶聚酰胺纤维素硅酸镁氧化镁
硅胶薄层分离弱极性化合物较
聚酰胺薄层分离含游离酚羟基黄酮苷较
纤维素薄层适合分离糖苷混合物
1．硅胶薄层 常溶剂系统：
（1）甲苯 甲酸乙酯 甲酸（5：4：1） 分离黄酮苷元
（3）氯仿 甲醇（85：15） 分离黄酮苷
硅胶分离黄酮成分遵循正相色谱规律化合物极性越强需溶剂极性越Rf值序：
RCH3 ＞ RH ＞ ROCH3 ＞ RO糖 ＞ ROH
2 聚酰胺薄层 常溶剂：
（1）甲醇 水（8：2）
（2）苯 丁酮 甲醇（60：20：20） 分离黄酮苷元
8 黄酮定量分析
四高效液相色谱法
2）反相色谱
A分离OH黄酮苷苷元
B烷基键合相常固定相分离效果常C8（辛烷基）C18（十八烷基）键合相
C黄酮分子中OH存流动相中加入少量酸峰形变更尖锐流动相乙腈 水甲醇 水等组成系统较甲醇水醋酸（磷酸缓液）
9含黄酮常中药分析
黄芩质量分析
葛根质量分析
第十二章 醌类分析
1醌类化合物四种结构类型：
（1）萘醌（含紫草中）（2）菲醌（丹参中含量菲醌类衍生物丹参酮隐丹参酮等）（3）苯醌（4）蒽醌
2分布情况
中药中含蒽醌成分蓼科植物中黄虎杖朱砂莲首乌等茜草科茜草百合科芦荟鼠李植物中含种蒽醌类化合物170种
3药理活性
A 泻作
（1）蒽醌苷致泻作 > 苷元
（2）分子中含羧基蒽苷 > 含羧基蒽苷
（3）二蒽酮苷（番泻苷AD）二蒽酚类（原型）> 蒽醌苷（氧化型）
B 抑菌作：苷元强苷
C 作：抗癌作（黄素黄酸等）
抗抑郁作（金丝桃素 中位萘骈二蒽酮贯叶连翘）
4酸性 游离蒽醌结合蒽醌含酚羟基具定酸性碱形成类盐物碱性溶液中中性机溶媒中溶解度
1) 带羧基酸性 > 带羧基
2) β羟基酸性 > α 羟基酸性
3) 羟基数目越酸性越强
蒽衍生物酸性强弱序：
COOH ＞ 2β酚羟基 ＞ 1β酚羟基 ＞2α酚羟基＞1α酚羟基
（溶NaHCO3溶液）（溶 Na2CO3） （溶1 NaOH）（溶 5NaOH溶液）
5显色反应
1碱反应
蒽醌类成分遇碱显红色紫红色称Borntrager’s反应蒽酮蒽酚二蒽酮类必须氧化成蒽醌会呈阳性反应
游离蒽醌羟基位置产生颜色(见书370)
通显色剂：1）氨气 2）10氢氧化钾甲醇溶液
3）35氢氧化钠溶液碳酸钠溶液
碱反应稳定性较差注意事项：
（1）产物颜色光氧稳定日光放置15min吸收度降50求避光保存（1h稳定）
NaOH+氨水混合溶液稳定性保存2h
（2）干扰较
2 醋酸镁反应优点
（1）醋酸镁试剂甲醇溶剂反应生成物甲醇中溶解良Borntrager’s反应常含溶性颗粒
（2）醋酸镁反应呈现颜色稳定日光少维持45min未见明显变化
（3）反应灵敏度较高
醋酸镁反应中般试剂浓度05醋酸镁甲醇溶液
3．亚硝基二甲基苯胺反应
羟基蒽酮类尤18二羟基蒽酮衍生物910位未取代时01亚硝基二甲基苯胺吡啶溶液反应呈色
反应蒽酮类化合物定性检查含量测定该反应受蒽醌类黄酮类香豆素糖类酚类成分干扰
6 蒽醌定性分析
1．碱液试验
中药提取物升华物加氢氧化钠氨水试液显橙红色红色蓝色黄决明子茜草等
决明子鉴 P371
二薄层色谱定性分析
2．分析实例
样品甲醇乙醇提取物（总蒽醌）提取物水解氯仿乙醚提取苷元进行薄层色谱显色方法喷氢氧化钾溶液氨气熏紫外灯观察荧光
7 蒽醌定量分析
1色法
该方法蒽醌类成分碱液醋酸镁试液生成红色500550nm处吸收进行色法测定
例2：黄中蒽醌类成分测定
3高效液相色谱法
黄中氧化型蒽醌苷元（A）苷（C）原型蒽醌苷元（B）苷（D）测定
HPLC测定流程图
8含蒽醌常中药分析
黄质量分析P385
9萘醌菲醌分析
紫草质量分析 P389
二．丹参质量分析 P392
第十三章 香豆素分析
1含香豆素类化合物常中药白芷秦皮独活前胡阿魏补骨脂茵陈蒿川芎防风蛇床子等
2理化性质
1．通性
具芳香气水蒸气挥发升华
溶水难溶水溶石油醚苯乙醚氯仿乙醇等溶剂中定量测定时氯仿乙醇提取
2．碱作
香豆素具αβ饱δ酯结构稀碱溶液中渐渐水解开环生成式邻羟基桂皮酸盐稳定酸化．复原
利种性质处理复杂植物提取物香豆素类中性酸性酚性成分分离开
3．显色反应
（1）异羟基肟酸铁反应：
香豆素具酯环异羟基肟酸铁反应产生紫红色鉴色测定反应：
（2）酚类试剂反应：
该类化合物具酚羟基常规酚类试剂反应三氯化铁硝酸银氨溶液三氯化铁 铁氰化钾
果香豆素化合物C6位（酚羟基位）没取代基 Emerson试剂反应显橙红色Gibbs试剂反应显蓝色
Emerson反应香豆素类化合物溶碱性溶液中加入2 4 氨基安林溶液数滴8铁氰化钾溶液23滴显色
4．荧光紫外吸收
（1）香豆素类化合物紫外光射显蓝色荧光作定性鉴作定量测定
（2）羟基香豆素紫外光强荧光难辨认呋喃香豆素较弱紫外光显示蓝紫棕绿黄等色必时喷10 KOH醇液20 SbCl3氯仿液显色
（3）香豆素类化合物羟基芳环形成轭体系具较强紫外特征吸收香豆素化合物pH条件表现光谱特性该类成分分析具重意义
3 香豆素定性分析
．化学定性分析
1．荧光反应 （2）前胡鉴
取前胡粉末1g加乙醚10ml浸渍2h取乙醚液2 滴分点两张滤纸片置紫外光灯（365nm）观察显淡天蓝色荧光然滴加15％氢氧化钠溶液数滴2 min荧光消失张滤纸片避光保存张滤纸片曝光约3h置紫外光灯（365nm）观察曝光者天蓝色荧光加强避光者显荧光
四．定量分析方法
（）色法
（1）该方法基香豆素类化合物酯环官团苯环羟基性质选择适显色剂反应产生颜色进行色方法异羟肟酸铁4 氨基安林氨基林三氯化铁三氯化铁 铁氰化钾磷钼酸磷钨酸
（2）果酚羟基位邻位未取代碱性溶液中重氮化氨基苯磺酸反应生成紫色红色
（3）香豆素衍生物C6位没取代基Gibbs试剂反应生成蓝色
（二）紫外分光光度法
1．应原理 香豆素类衍生物紫外吸收光谱般表现λmin244士4nmλmax275士4nmλmin300士5nmλmax315士8nm
4含香豆素常中药分析
秦皮质量分析 P406
第十四章 挥发油分析
1．挥发油类成分分布
挥发油（volatile oils）存植物体中类水蒸气蒸馏水相混溶油状液体常温挥发部分具香气
n 品种植物生长环境采收季节挥发油含量品质均显著差异
n全草类药材般开花前期含苞放时含油量高薄荷
荆芥紫苏等
n根根茎类药材秋天成熟挥发油含量高白 术苍术
n挥发油中含化学成分较复杂种中药挥发油常含十种二百种成分中某种某数种成分占较量
n挥发油类成分植物界分布极广泛存植物花蕾茎叶根茎中植物腺毛腺鳞油油室油腔油细胞分泌细胞树脂道中
2挥发油提取方法
1）蒸馏法：水蒸馏法水蒸气蒸馏法
2）浸取法：宜蒸馏法提取挥发油原料直接利机溶剂进行萃取常方法油脂吸收法溶剂萃取法超界流体萃取法
3）冷压法：适新鲜原料桔柑柠檬果皮含挥发油较原料撕裂捣碎冷压静置分层离心机分出油分粗品
3挥发油鉴定
官基团鉴定
n1）酚类：加三氯化铁试剂呈兰色蓝紫色绿色
n2）羰基化合物：银镜反应苯肼苯肼衍生物氨基脲羟胺等反应
n3）饱化合物薁类化合物：溴氯仿溶液红色褪表示油中含饱化合物继续滴加溴氯仿溶液产生兰色紫色绿色反应表明含薁类化合物
n4）酯类化合物：加入亚硝酸铁氰化钠试剂氢氧化钠溶液出现红色逐渐消失表明油中含酯类化合物
4挥发油定量分析
挥发油定性分析常相保留时间进行加峰面积方法作已知化合物定性鉴
n定量分析挥发油化学成分常干化合物沸点接者分异构体时成分未知易标法外标法
n通常法
n挥发油中成分含量高分离度标法外标法进行定量分析
n气 质联方法挥发油研究中已日趋普遍
二．薄层色谱法
（）应特点概况
1．薄层色谱条件选择
挥发油薄层色谱条件根极性加分离油中含类化合物极性序：
n 烃（萜）＜醚＜酯＜醛酮＜醇酚＜酸
n 挥发油薄层色谱硅胶氧化铝薄层外采硝酸银薄层萜类化合物双键数目位置硝酸银形成π络合物难易稳定性差分离硝酸银吸附剂中含量 25宜
2．薄层显色剂
（1）茴香醛 浓硫酸试剂：喷105℃加热挥发油中成分显颜色
（2）异羟肟酸铁试剂：斑点显淡红色酯酯
（3）24 二硝基苯肼试剂：产生荧光斑点表明含醛酮类化合物
（4）三氯化铁试剂：斑点显绿色蓝色酚性化合物
三．定量分析方法
（）挥发油总量测定（蒸馏法）
1．测定重10挥发油
2．测定重10挥发油
5含挥发油常中药分析（学）
肉桂质量分析
第十五章 类化学成分分析
1常氨基酸分析方法
l 薄层色谱常支持剂硅胶展开剂正丁醇 醋酸 水（65：15：20）正丁醇 甲酸 水（75：15：10）乙醇 氨水（4：1）正丁醇 甲酸乙酯 水（2：2：1）
l纸色谱常展开剂：正丁醇 醋酸 乙醇 水（4：1：1：2）甲醇 水 吡啶（80：20：4）正丁醇 12％氨水 乙醇（13：3：3）水饱酚
l采2种溶剂系统进行双层析
l常氨基酸通显色剂：
1）茚三酮试剂：喷110℃加热显色般氨基酸呈紫色氨基酸脯氨酸海草酸显黄色氨气反应应注意避免氨气干扰
2）12 萘醌 4 磺酸（Fo1in试剂）：喷室温干燥氨基酸呈颜色
2总糖定量分析
1)苯酚 硫酸法测定
2) 35 二硝基水杨酸（DNS）法测定
3)蒽酮 硫酸法测定
3．含机酸常中药分析
（）金银花中机酸分析
4环烯醚萜类分析
环烯醚萜苷存栀子鸡矢藤马钱子肉苁蓉等中药中4甲基环烯醚萜甙黄玄参车前等中药成分
裂环烯醚萜（secoirdoid）类成分环烯醚萜开环衍生物类成分龙胆科植物中发现尤龙胆属獐芽菜属植物中存更普遍
定性分析
l该类成分氨基酸加热显深红色蓝色冰醋酸溶液加少量铜盐显蓝色Shear试剂（浓盐酸苯胺1：15混合）反应显颜色
l薄层定性分析硅胶G硅胶GF254薄层板聚酰胺薄膜
l显色剂硫酸乙醇溶液茴香醛试液香草醛硫酸试液二甲
氧基苯甲醛 硫酸溶液
5．环烯醚萜苷常中药分析
（）黄中环烯醚萜苷分析
（二）龙胆中裂环烯醚萜苷分析
6木脂素类分析
木脂素类化合物裸子植物子植物中分布较广存植物木部树脂中
常中药五味子厚朴刺五加细辛含木脂素类成分
7含木脂素常中药分析
（）五味子中木脂素类成分分析
（二）厚朴中木脂素类成分分析
8萜类衍生物分析 含萜类衍生物常中药分析
（）白芍中单萜苷分析
（二）木香中倍半萜酯分析
（三）穿心莲中二萜酯分析
第十六章 动物药分析
1 动物药化学成分分类
（1）蛋白质水解产物
（2）生物碱类
（3）甾类化合物
（4）酮类酸类成分
2胆汁酸结构特征动物界分布
天然胆汁酸胆烷酸衍生物动物胆汁中通常甘氨酸牛磺酸肽键结合成甘氨胆汁酸牛磺胆汁酸钠盐形式存
高等动物胆汁中通常发现胆汁酸含24碳原子胆烷酸衍生物常见胆酸氧胆酸鹅氧胆酸α猪氧胆酸石胆酸等
鱼类两栖类爬行类动物中发现胆汁酸含27碳原子28碳原子类胆汁酸粪甾烷酸羟基衍生物通常牛磺酸相结合存动物胆汁中
3．胆汁酸化学性质
A末端羧基反应
1）成盐：游离胆汁酸类水中溶解度形成盐易溶水胆酸20℃水中溶解度0028％钠盐56％
2）原反应：胆汁酸乙醚中氢化锂铝作者乙醇中金属钠作羟基原C24酸原成相应C24醇
B环羧基乙酰化反应
甾环羟基常法乙酰化乙酰化物容易结晶定熔点利胆汁酸纯化精制
C甾环酮基原反应
胆酸易外胆汁酸资源限度量制备床困难目前般采胆酸作原料加工制备C7位羟基变氧胆酸C12位羧基变鹅氧胆酸C7C12位羟基变石胆酸
4．胆汁酸鉴方法
（1）化学法
1）Penkofer反应：原理蔗糖浓硫酸作生成羟甲基糖醛者胆汁酸结合成紫色物质
2）Gregory Pascoe反应：加45％硫酸03％糠醛胆汁存溶液显蓝色方法胆酸定量分析
（2）薄层色谱法
③ 显色剂：30％硫酸试剂10％磷钼酸乙醇试剂苯甲酸试剂茴香醛试剂三氯化铁试剂三氯化锑试剂重铬酸钾饱80％硫酸试剂等
5牛黄熊胆猪胆粉源化学成分
1．牛黄
牛黄牛科动物牛Bos Taurus domesticus Gmelin胆囊结石少数胆肝结石具清心开窍镇惊豁痰息风解毒功效
牛黄中含较胆汁酸中胆酸（5~11）氧胆酸（约2％）鹅氧胆酸（06~17）盐类含7SMC（Smooth muscle contractor水溶性肽类化合物具收缩滑肌降低血压作）胆红素（bilirubin）钙盐盐胆甾醇种氨基酸种机元素
天然牛黄工牛黄成分
1）天然牛黄 ： 2）工牛黄：
胆红素 胆红素
氧胆酸 猪氧胆酸
胆酸 胆酸
氧胆酸 胆固醇
结合型胆甾酸盐 磷酸三钙
牛黄酸 硫酸镁
胆固醇 硫酸亚铁
粘蛋白 淀粉
氨基酸
肽类脂肪酸
卵磷脂
钙盐机盐
2．熊胆
熊胆熊科动物黑熊Selenarctos thibetanus Cuvier熊Ursus arctos L 干燥胆清热解痉肝明目功效
熊胆化学成分胆汁酸中熊氧胆酸（ursodeoxycholic acid）占部分含鹅氧胆酸（chenodeoxycholic acid）胆酸氧胆酸等胆酸通常牛磺酸甘氨酸结合形成钠钙盐存
熊胆解痉作效成分熊氧胆酸熊胆特成分
3．猪胆粉
猪胆粉猪科动物猪Sus scrofa dommestica Brisson 胆汁干燥品清热润燥解毒止咳喘功效
猪胆中含种胆汁酸类成分成分猪氧胆酸含鹅氧胆酸胆酸等成分
6牛黄定性分析
2) 薄层色谱法
取品粉末10mg加氯仿20ml超声处理30min滤滤液蒸干残渣加乙醇1ml溶解作供试品液取胆酸氧胆酸品加乙醇制成1ml含2mg混合溶液作品液
吸取述溶液2μl分点硅胶G薄层板异辛烷 乙酸乙酯 冰醋酸（15：7：5）展开剂展开取出晾干喷10 硫酸乙醇液105℃加热斑点显色清晰置紫外光灯（365nm）检视供试品色谱中品色谱相应位置显相颜色两荧光斑点
工牛黄定性鉴：
（1）取工牛黄粉末适量分2份1份加硫酸呈污绿色1份加硝酸显红色
（2）工牛黄见光λCHCl3max453nm处吸收
（3）工牛黄天然牛黄IR吸收光谱明显差异
（4）胆红素化学反应：
Van den Bergh反应（重氮化反应）：胆红素重氮化试剂中氨基苯磺酸合成偶氮染料偶氮染料强酸中呈蓝紫色pH20 ~ 55呈红色5呈绿色（500 ~ 560nm）
反应中首先分子断裂胆色素分子中必须中央甲烯基（CH2）存显色（例胆绿素显示反应）
7熊胆定性分析
1)化学法
取胆仁粉末紫外光灯应显黄白色荧光应显棕黄色荧光取粉末约02g溶7％冰醋酸溶液20ml中溶液应显浅蓝色乳浊荧光（牛羊胆区）
2)薄层色谱法
（1）取胆仁约100mg加甲醇10m1温热溶放冷滤滤液浓缩干加20％氢氧化钠溶液5ml水浴水解5h放冷加盐酸pH 2~3乙酸乙酯萃取浓缩约5ml供试取胆酸熊氧胆酸猪氧胆酸鹅氧胆酸氧胆酸品分点硅胶G板异辛烷 乙醚 冰醋酸 正丁醇 水（10：5：5：3：1层）取出晾干喷30％浓硫酸105℃干燥10min供试品应熊氧胆酸相斑点
8麝香质量分析
麝香（moschus）鹿科动物林麝Moschus berezovskii Flerov马麝M sifanicus Przewalski原麝M moschiferus Linnaeus雄体香囊中分泌物具抗炎强心雄性激素样等作
麝香化学成分复杂目前已知：
（1）麝香酮（muscone）
含量约09％~3％天然麝香效成分麝香香味成分特异强烈香气冠心病硝酸甘油样作
（二）定量分析
1．气相色谱法
2．色法
3．高效液相色谱法
9蟾酥质量分析 P481
（）定性分析 1．化学法
（二）定量分析 1．高效液相色谱法
第十七章 矿物药分析
1矿物药特点
（1）相固定化学组成数机化合物
（2）固态具确定晶体结构
（3）岩石种固态矿物组成集合体定物理化学条件相稳定外界条件变化定程度时改变组成新条件稳定化合物
2 第二节矿物药常理化分析方法
矿物药分析般程序：取样 试样分解 定性分析 定量分析
中试样分解测组分转入溶液中重步骤般求：
① 试样分解必须完全
② 试样分解程中测组分应损失
③ 试样分解程中应引入测组分干扰组分
常分解方法：溶解法（湿法）熔融法（干法）两种
1）溶解法：简便分解方法试样溶解水酸溶剂中分解方法通常采水稀酸浓酸混合酸序进行处理溶解法试样完全溶解时采熔融法
2）熔融法：试样固体熔剂混合然高温加热全熔半熔欲测组分转变溶水酸中化合物熔剂分碱性熔剂（碳酸钠氢氧化钠）酸性熔剂（硫酸氢钾焦硫酸钾）氧化性熔剂（氧化钠碳酸钠加硝酸钾）原性熔剂（碳酸钠加硫）等根矿物药性质加选
．容量法
1)配位滴定法测定含钙铝等矿物药标准溶液乙二胺四醋酸二钠液直接滴定石膏钟乳石紫石英加量乙二胺四醋酸二钠溶液锌液回滴白矾
2）pH值控制
EDTA滴定中pH值非常重种金属离子低pH值求低pH值配合物稳定
定pH值范围种离子间相互干扰利控制pH值方法溶剂中连续滴定种离子
EDTA滴定常指示剂pH7时二甲基橙pH7时铬黑T铬黑蓝R紫脲酸胺
3） 掩蔽剂
消离子间干扰述控制pH方法外常掩蔽剂掩蔽剂分两种形式：
① 利配位反应降低干扰离子浓度消干扰方法称配位掩蔽法
② 利产生沉淀掩蔽方法称沉淀掩蔽法
二．重量法
1 沉淀求：
（1）测组分沉淀完全形成沉淀溶解度沉淀剂选择恰量产生离子效应促沉淀完全般超20％ ~ 50％宜时产生配合反应沉淀溶解度加
（2）沉淀纯净避免沉淀
沉淀源：
① 表面吸附沉淀颗粒越表面吸附越
② 吸留沉淀速度快杂质包入中
③ 沉淀指放置程中物质沉淀
提高沉淀纯度应易吸附物质浓度降低反复洗涤沉淀沉淀粒子加
（3）求沉淀颗粒易洗涤滤
2 加颗粒办法：
① 减少沉淀物质浓度稀溶液中慢慢加入沉淀剂断搅拌防止局部浓度
②增加沉淀程中沉淀溶解度热溶液中进行沉淀
③陈化放段时间
3第三节 常矿物药质量分析
朱砂质量分析 P504
二．雄黄质量分析 P505
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