附件13
食品中玉米赤霉烯酮快速检测
胶体金免疫层析法
(KJ201913)
1 范围
标准规定食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法
标准适玉米麦碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定
第法 色法
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中玉米赤霉烯酮提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线（T线）控制线（C线）颜色深浅较样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯试验水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 乙腈
312 甲醇+水（7+3体积）
313 稀释缓液（胶体金免疫层析检测试剂盒专提取液根产品说明书配置）
32 参考物质
玉米赤霉烯酮中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见表1纯度≥95
表1 玉米赤霉烯酮参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
玉米赤霉烯酮
Zearalenone
17924924
C18H22O5
31836
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
331 标准储备液：称取适量标准品乙腈（311）溶解配制成浓度100 μgmL标准储备液﹣18 ℃避光保存效期6月
332 标准工作液：准确量取标准储备液（100 μgmL）（331）100 μL置10 mL容量瓶中乙腈（311）稀释刻度摇匀制成浓度1 μ稀mL玉米赤霉烯酮标准工作液2 ℃～8 ℃避光保存效期1月
34 材料
玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒适基质玉米麦碾磨加工品
4 仪器设备
41 移液器：100 μL200 μL1 mL5 mL
42 旋涡混合器
43 离心机
44 电子天：感量001 g
5 环境条件
环境温度：20 ℃～30 ℃
空气相湿度：佳测定湿度45 ～65 湿度低45 相应延长测液试纸条反应时间质控实验准湿度65 ～80 微孔试纸条拆开立避免微孔试纸条长时间暴露空气中受潮避免湿度80 湿度进行实验
6 分析步骤
61 试样制备
GB 5491扦取样品充分碾磨粉碎混匀40目筛
62 提取
准确称取试样50 g（精确001 g）50 mL离心中加入20 mL 甲醇+水溶液（312）旋涡混合器振荡3 min离心分层静置分层清液备
准确移取08 mL稀释缓液（313）15 mL离心中加入25 μL清液混匀检
63 测定步骤
检验需取相应数量金标微孔试纸条做标记吸取检液200 μL金标微孔中抽吸孔底紫红色颗粒完全溶解孵育10 min试纸条插入金标微孔中反应3 min～5 min
金标微孔中取出试纸条弃试纸条端样品垫观察显色情况进行结果判定（试剂盒冷藏保存前需恢复实验环境温度）
7 质控试验
批样品应时进行空白试验阳性质控试验根检测样品量制定适宜频次质控试验
71 空白试验
711 试剂空白试验：称取试样外均6263述步骤操作
712 基质空白试验：准确称取空白试样6263述步骤操作
72 阳性质控试验
准确称取玉米赤霉烯酮含量60 μgkg质控样6263步骤操作准确称取空白试样加入定体积玉米赤霉烯酮标准工作液（332）玉米赤霉烯酮添加量60 μgkg6263步骤操作
8 结果判定
通控制C线检测T线颜色深浅进行结果判定
81 效结果
样品中玉米赤霉烯酮存控制C线均会出现条紫红色条带C线未显色表明操作正确试纸条已失效检测结果效（见图1）
效
图1 试纸条目视判定图
82 阳性结果
控制C线显色检测T线显色C线浅者没颜色判定阳性（见图2）
83 阴性结果
控制C线显色检测T线显色C线深者致判定阴性（见图2）
色法
图2 试纸条目视判定图
84 质控试验求
空白试验结果应阴性阳性质控试验结果应阳性
第二法 消线法
9 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中玉米赤霉烯酮提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通T线显色否进行结果判定
10 试剂材料
3
11 仪器设备
4
12 环境条件
环境温度：10 ℃～40 ℃
空气相湿度：5
13 分析步骤
131 试样制备
61
132 提取
准确称取试样50 g（精确001 g）50 mL离心中加入125 mL甲醇+水溶液（312）旋涡混合器振荡3 min离心分层静置分层清液备
准确移取400 μL稀释缓液（313）15 mL离心中加入清液(麦50 μL玉米80 μL）混匀测
133 测定步骤
63
14 质控试验
批样品应时进行空白试验阳性质控试验根检测样品量制定适宜频次质控试验
141 空白试验
1411 试剂空白试验：称取试样外均132133述步骤操作
1412 基质空白试验：准确称取空白试样132133述步骤操作
142 阳性质控试验
准确称取玉米赤霉烯酮含量60 μgkg质控样132133步骤操作准确称取空白试样加入定体积玉米赤霉烯酮标准工作液（332）玉米赤霉烯酮添加量60 μgkg132133步骤操作
15 结果判定
通观察检测T线显色否进行结果判定
151 效
81
152 阳性结果
控制C线显色检测T线显色判定阳性（见图3）
153 阴性结果
控制C线显色检测T线显色判定阴性（见图3）
消线法
图3 试纸条目视判定图
16 质控试验求
84
第三法 读数仪法
17 具体检测步骤结果判定参考相应说明书操作质控试验参第法第二法
18 结
方法筛查出阳性样品进行确认时应GB 2761指定方法标准检测判定
19 性指标
191 检出限
60 μgkg
192 灵敏度
灵敏度≥95
193 特异性
特异性≥90
194 假阴性
假阴性≤5
195 假阳性
假阳性≤10
注：性指标计算方法见附录A
20
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方便方法者方法时做限定方法者代试剂试剂盒操作步骤前须进行考察满足方法规定项性指标时方
方法参标准GB 50092092016 食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮测定
附录A
快速检测方法性指标计算表
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N21
N2N12+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异（c2）
c2（½N12N21½1）2（N12+N21）
度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a样品中实际公议值结果
b玉米赤霉烯酮胶体金试纸条检验方法结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法起草单位：成市食品药品检验研究院
方法参单位：江南学国家粮食局科学研究院广东省食品检验山东省食品药品检验研究院浙江省食品药品检验研究院
方法起草：肖全伟姚蕾珺王昕张敏胥传田洪芸沈泓周露
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食品中玉米赤霉烯酮快速检测
胶体金免疫层析法
(KJ201913)
1 范围
标准规定食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法
标准适玉米麦碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定
第法 色法
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中玉米赤霉烯酮提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线（T线）控制线（C线）颜色深浅较样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯试验水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 乙腈
312 甲醇+水（7+3体积）
313 稀释缓液（胶体金免疫层析检测试剂盒专提取液根产品说明书配置）
32 参考物质
玉米赤霉烯酮中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见表1纯度≥95
表1 玉米赤霉烯酮参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
玉米赤霉烯酮
Zearalenone
17924924
C18H22O5
31836
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
331 标准储备液：称取适量标准品乙腈（311）溶解配制成浓度100 μgmL标准储备液﹣18 ℃避光保存效期6月
332 标准工作液：准确量取标准储备液（100 μgmL）（331）100 μL置10 mL容量瓶中乙腈（311）稀释刻度摇匀制成浓度1 μ稀mL玉米赤霉烯酮标准工作液2 ℃～8 ℃避光保存效期1月
34 材料
玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒适基质玉米麦碾磨加工品
4 仪器设备
41 移液器：100 μL200 μL1 mL5 mL
42 旋涡混合器
43 离心机
44 电子天：感量001 g
5 环境条件
环境温度：20 ℃～30 ℃
空气相湿度：佳测定湿度45 ～65 湿度低45 相应延长测液试纸条反应时间质控实验准湿度65 ～80 微孔试纸条拆开立避免微孔试纸条长时间暴露空气中受潮避免湿度80 湿度进行实验
6 分析步骤
61 试样制备
GB 5491扦取样品充分碾磨粉碎混匀40目筛
62 提取
准确称取试样50 g（精确001 g）50 mL离心中加入20 mL 甲醇+水溶液（312）旋涡混合器振荡3 min离心分层静置分层清液备
准确移取08 mL稀释缓液（313）15 mL离心中加入25 μL清液混匀检
63 测定步骤
检验需取相应数量金标微孔试纸条做标记吸取检液200 μL金标微孔中抽吸孔底紫红色颗粒完全溶解孵育10 min试纸条插入金标微孔中反应3 min～5 min
金标微孔中取出试纸条弃试纸条端样品垫观察显色情况进行结果判定（试剂盒冷藏保存前需恢复实验环境温度）
7 质控试验
批样品应时进行空白试验阳性质控试验根检测样品量制定适宜频次质控试验
71 空白试验
711 试剂空白试验：称取试样外均6263述步骤操作
712 基质空白试验：准确称取空白试样6263述步骤操作
72 阳性质控试验
准确称取玉米赤霉烯酮含量60 μgkg质控样6263步骤操作准确称取空白试样加入定体积玉米赤霉烯酮标准工作液（332）玉米赤霉烯酮添加量60 μgkg6263步骤操作
8 结果判定
通控制C线检测T线颜色深浅进行结果判定
81 效结果
样品中玉米赤霉烯酮存控制C线均会出现条紫红色条带C线未显色表明操作正确试纸条已失效检测结果效（见图1）
效
图1 试纸条目视判定图
82 阳性结果
控制C线显色检测T线显色C线浅者没颜色判定阳性（见图2）
83 阴性结果
控制C线显色检测T线显色C线深者致判定阴性（见图2）
色法
图2 试纸条目视判定图
84 质控试验求
空白试验结果应阴性阳性质控试验结果应阳性
第二法 消线法
9 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中玉米赤霉烯酮提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通T线显色否进行结果判定
10 试剂材料
3
11 仪器设备
4
12 环境条件
环境温度：10 ℃～40 ℃
空气相湿度：5
13 分析步骤
131 试样制备
61
132 提取
准确称取试样50 g（精确001 g）50 mL离心中加入125 mL甲醇+水溶液（312）旋涡混合器振荡3 min离心分层静置分层清液备
准确移取400 μL稀释缓液（313）15 mL离心中加入清液(麦50 μL玉米80 μL）混匀测
133 测定步骤
63
14 质控试验
批样品应时进行空白试验阳性质控试验根检测样品量制定适宜频次质控试验
141 空白试验
1411 试剂空白试验：称取试样外均132133述步骤操作
1412 基质空白试验：准确称取空白试样132133述步骤操作
142 阳性质控试验
准确称取玉米赤霉烯酮含量60 μgkg质控样132133步骤操作准确称取空白试样加入定体积玉米赤霉烯酮标准工作液（332）玉米赤霉烯酮添加量60 μgkg132133步骤操作
15 结果判定
通观察检测T线显色否进行结果判定
151 效
81
152 阳性结果
控制C线显色检测T线显色判定阳性（见图3）
153 阴性结果
控制C线显色检测T线显色判定阴性（见图3）
消线法
图3 试纸条目视判定图
16 质控试验求
84
第三法 读数仪法
17 具体检测步骤结果判定参考相应说明书操作质控试验参第法第二法
18 结
方法筛查出阳性样品进行确认时应GB 2761指定方法标准检测判定
19 性指标
191 检出限
60 μgkg
192 灵敏度
灵敏度≥95
193 特异性
特异性≥90
194 假阴性
假阴性≤5
195 假阳性
假阳性≤10
注：性指标计算方法见附录A
20
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方便方法者方法时做限定方法者代试剂试剂盒操作步骤前须进行考察满足方法规定项性指标时方
方法参标准GB 50092092016 食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮测定
附录A
快速检测方法性指标计算表
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N21
N2N12+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异（c2）
c2（½N12N21½1）2（N12+N21）
度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a样品中实际公议值结果
b玉米赤霉烯酮胶体金试纸条检验方法结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法起草单位：成市食品药品检验研究院
方法参单位：江南学国家粮食局科学研究院广东省食品检验山东省食品药品检验研究院浙江省食品药品检验研究院
方法起草：肖全伟姚蕾珺王昕张敏胥传田洪芸沈泓周露
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