水产品中氯霉素快速检测
胶体金免疫层析法
(KJ201905)
1 范围
方法规定水产品中氯霉素胶体金免疫层析快速检测方法
方法适水产品中氯霉素快速测定
2 原理
方法测定竞争抑制免疫层析原理基础样品中氯霉素机试剂提取固相萃取柱净化浓缩复溶氯霉素胶体金标记特异性单克隆抗体结合抑制抗体微孔膜检测线(T线)抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线控制线颜色深浅较样品中氯霉素含量进行定性判定
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水 GBT 6682 规定二级水
31 试剂
311 正烷
312 丙酮
313 乙酸乙酯
314乙腈
315磷酸二氢钠NaH2PO4·2H2O
316磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O
317 氯化钠
318 复溶液:称取012 g磷酸二氢钠 (315)置100 mL容量瓶中水溶解稀释刻度制成溶液A称取磷酸氢二钠716 g (316)置100 mL容量瓶中水溶解稀释刻度制成溶液B取溶液A 28 mL溶液B 72 mL氯化钠(317)085 g水溶解稀释100 mL磷酸盐缓液复溶液
319丙酮正烷(1+9):丙酮(312)正烷(311)体积1:9混匀
3110丙酮正烷(6+4):丙酮(312)正烷(311)体积6:4混匀
32 标准物质
氯霉素标准物质中文名称英文名称CAS登录号分式相分子质量见表1纯度≥986
表1 氯霉素参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
氯霉素
Chloramphenicol
56757
C11H12Cl2N2O5
32313
注:等溯源物质
33标准溶液配制
331 氯霉素标准储备液(1 mgmL):精密称取氯霉素标准物质(32)10 mg置10 mL容量瓶中乙腈(314)溶解稀释刻度摇匀制成浓度1 mgmL氯霉素标准储备液4℃避光保存效期6月
332 氯霉素标准中间液A(10 μgmL):精密量取氯霉素标准储备液(1 mgmL)(331)01 mL置10 mL 容量瓶中乙腈(314)稀释刻度摇匀制成 10 μgmL氯霉素标准中间液A4℃避光保存效期3月
333 氯霉素标准工作液(001 μgmL):精密移取氯霉素标准中间液A(10 μgmL)(332)001 mL分置10 mL容量瓶中乙腈稀释刻度摇匀制成浓度001 μgmL氯霉素标准工作液新配
34材料
341固相萃取柱:Cleanert Silica200 mg6mLLOT:0170198
342免疫胶体金试剂盒(2~30℃干燥阴凉条件保存产品效期)
3421 金标微孔
3422 试纸条检测卡
4 仪器设备
41 移液器:200 μL1 mL5 mL
42 涡旋混合器
43 离心机:转速≥4000 rmin
44 电子天:感量分 001 mg 001 g
45 样品浓缩仪:需
46 环境条件: 温度:15~25℃相湿度:≤60
5分析步骤
51试样制备
取具代表性样品约500 g充分粉碎混匀均分成两份分装入洁净容器作试样留样密封标记常温保存
52试样提取净化
准确称取试样6 g(精确001 g)置50 mL具塞离心中次加入1 mL水8 mL乙酸乙酯(313)涡旋提取5 min4000 rmin离心5 min转移全部乙酸乙酯层50 mL具塞离心中加入正烷25 mL氯化钠1 g涡旋混匀4000 rmin 离心1 min清液净化5 mL丙酮正烷(1+9)(319)淋洗LCSi硅胶柱弃淋洗液净化溶液转移固相萃取柱弃流出液5 mL丙酮正烷(6+4)(3110)洗脱收集洗脱液洗脱液40℃氮气吹干精密加入600 µL复溶液(318)涡旋混合1 min作测液
53 测定步骤
531 检测卡金标微孔测定步骤
吸取150 µL样品测液反应微孔(3421)中抽吸 5~10次混合均匀室温温育3 min温育结束金标微孔中溶液滴加检测卡(3422)加样孔中室温温育5~8 min结果进行判定
532 试纸条金标微孔测定步骤
吸取150 µL样品测液反应微孔(3421)中抽吸5~10次混合均匀室温温育3 min温育结束检测试纸条(3422)吸水海绵端垂直插入反应微孔中室温温育3 min微孔中取出试纸条掉试纸条端吸水海绵5 min进行结果判定
533 检测卡测定步骤
吸取150 µL样品测液滴加检测卡(3422)加样孔中室温温育5~8 min结果进行判定
54质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
541 空白试验
称取空白试样5253步骤样品法操作
542 加标质控试验
准确称取空白样品6 g适量(精确001 g)置15 mL具塞离心中加入180 μL氯霉素标准工作液(001 μgmL)(333)氯霉素浓度03 μgkg式2份 5253步骤样品法操作
6 结果判定求
通控制线检测线颜色深浅进行结果判定长时间放置会引起检测线颜色变化需规定时间进行结果判定目视结果判读图1示
61 效
控制线(C线)显色表明正确操作试纸条检测卡效
62 阳性结果
检测线(T线)显色检测线(T线)颜色控制线(C线)颜色浅表明样品中氯霉素含量高方法检测限判定阳性
63 阴性结果
检测线(T线)颜色控制线(C线)颜色深者检测线(T线)颜色控制线(C线)颜色相表明样品中氯霉素含量低方法检测限判定阴性
64质量控制求
空白试验测定结果应阴性加标质控试验测定结果应阳性
7 结
测样品中氯霉素检测结果阳性时应采确证方法进行确证检测
8 性指标
81 检测限
氯霉素01 μgkg
82 灵敏度
灵敏度应≥98
83 特异性
特异性应≥90
84 假阴性率
假阴性率应≤1
85 假阳性率
假阳性率应≤10
注:性指标计算方法见附录A
9
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者代试剂试剂盒操作步骤前须进行考察应满足方法规定项性指标
方法参标准GBT 223382008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定 (包括修改单)
附录 A
定性方法性计算表
样品情况a
检验结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N21
N2N12+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异(χ2)
χ2(|N12N21|1)2(N12+N21)度(df)1
灵敏度(p+)
p+N11N1
特异性(p)
pN22N2
假阴性率(pf)
pfN12N11灵敏度
假阳性率(pf+)
pf+N21N21特异性
相准确度
(N11+N22)(N1+N2)
注:N特定单元结果数第标指行第二标指列例:N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
a基准方法检验结果
b方法检验结果灵敏度计算确认结果
方法负责起草单位:山西省食品药品检验
验证单位:陕西省食品药品检验广东省药品检验四川省食品药品检验检测院
起草:李倩阎安婷陈煜杨国伟
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