研究背景眼科常见致盲眼病白障青光眼糖尿病视网膜病变黄斑病等中青光眼继白障第二致盲原国青光眼发病率052患病数约700万xx年资料显示世界青光眼发病数xx年达7000万双眼盲目数达840万(quigley et alxx)众青光眼患者青光眼盲者仅患者带极身心痛苦造成社会济巨负担预防控制治疗青光眼十分重迫切青光眼种病理性眼压增高导致具特征性视神结构损伤视野缺损表现神性退行性视神病变终结局视网膜神节细胞(rgcs)凋亡视功逐渐丧失(buckingham et alxx)目前已量保护rgcs研究结果包括:改善视乳头微循环谷氨酸途径抑制剂神营养子诱导热休克蛋白表达抗氧化治疗等然青光眼发病机制尚未完全阐明信号转导受体通道研究rgcs损伤保护中作年正关注新研究方靶点关感受压力受体通道参传递病理刺激造成神损伤(quigley et alxx)trpc6(transient receptor potentialc6)新发现压力敏感参神元存活凋亡钙离子通透膜通道蛋白参课题trpc6通道视网膜缺血灌模型中视网膜神节保护作研究获价值前期研究结果:较全面精确定位trpc6通道基蛋白sd鼠视网膜尤rgcs表达分布trpc6rgc层选择性高表达探讨trpc6鼠视网膜缺血灌(ischemia reperfusionir)损伤程中表达变化trpc6基蛋白视网膜缺血损伤中灌注24时出现性表达升高体药理学实验结果显示激动剂oag具保护视网膜ir模型诱导rgcs免受损伤拮抗剂skf96365促进rgcs凋亡发生研究拟进步探讨trpc6作机制研究发现脑源性神营养子(brainderived neurotrophic factorbdnf)trpc通道信号转导调控细胞存活程中密切联系xx年4月中国科学院海神
科学研究王政研究员课题组nature neuroscience发表文首次证实表达trpc6trpc3保护脑神元抗血清剥夺导致细胞死亡发现bdnf位trpc36介导细胞保护信号通路游(tai et alxxajia et alxx)课题拟探讨bdnf介导trpc6通道蛋白保护视网膜模型诱导rgcs免受损伤作机制深入阐明青光眼发病机制床干预治提供新思路药物干预靶点具定现实意义课题研究分二部分:第部分视网膜ir模型中调控trpc通道时bdnf表达变化研究目sd鼠视网膜ir模型中检测bdnf基灌注时间点表达变化时检测抑制trpc通道时bdnf蛋白水变化探讨表达类型rgcs凋亡影响
二研究方法:
1视网膜ir模型中检测bdnf基表达采视神血钳夹法建立视网膜ir模型夹闭视网膜血供60分钟分灌注3时24时48时7天处死鼠摘取眼球显微镜剥离视网膜提取视网膜总rna利反转录聚酶链反应(rtpcr)实时荧光定量pcr(realtime pcr)测定bdnf基表达变化
2抑制trpc通道时检测bdnf蛋白表达建立鼠视网膜ir模型视网膜缺血术前30分钟右眼通玻璃体腔注射trpc拮抗剂skf96365实验组左眼注射溶剂pbs阴性组分灌3时6时12时24时48时72时处死鼠摘取眼球显微镜剥离视网膜提取视网膜总蛋白蛋白质免疫印迹(western blot)检测bdnf视网膜组织中蛋白表达水
3抑制trpc通道时检测bdnf基表达sd鼠分4组分进行处理:第组
眼球进行假手术行视神分离术行视网膜缺血手术第二组建立视网膜ir模型第三组视网膜缺血术前30分钟通玻璃体腔注射pbs溶液然建立视网膜ir模型第四组视网膜缺血术前30分钟通玻璃体腔注射注射skf96365然建立视网膜ir模型鼠灌注24时处死摘取眼球显微镜剥离视网膜提取视网膜总rnarealtime pcr测定bdnf基表达变化
三研究结果rtpcrrealtime pcr结果显示bdnf mrna灌注3时开始出现升高24时出现表达高峰组14倍(p<005n6)western blot结果显示应skf96365抑制trpc通道bdnf前体蛋白(precursor for bdnfprobdnf)表达量升高灌注24时达高峰组14倍(p<005n6)成熟型bdnf(mature bdnfmbdnf)整灌注程中未见明显变化缺血灌注24时ir+skf96365组bdnf基表达水分假手术组ir组ir+pbs组271714倍ir+pbs组统计学差异(p<005n6)
四结ir模型中bdnf基时间表达谱早trpc6(trpc6mrna水灌12时开始升高)提示bdnf位trpc6介导细胞保护作游trpc通道受抑制时bdnf基水probdnf蛋白水升高表明bdnf转录翻译水提高mbdnf没变化提示trpc通道反馈性影响bdnf翻译修饰程第二部分probdnfp75ntr信号通路视网膜ir模型诱导rgcs损伤中作:
研究目探索p75ntr信号通路视网膜ir诱导rgcs损伤中作
二研究方法荧光金(fluorogoldfg)通丘注射活体sd鼠rgcs进行逆行标记充分标记(7天)建立视网膜ir损伤模型视网膜缺血术前30分钟通右眼玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tatpep5
进行干预时左眼注射溶剂dmso阴性分灌24时48时72时7天处死鼠常规心脏灌流取视网膜铺荧光显微镜行rgcs计数结果进行统计分析
三研究结果统计分析结果显示灌注48时玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tatpep5组较注射溶剂dmso组显著增加rgcs数目(p<005n6)
四结ir模型中probdnfp75ntr信号通路参抑制trpc通道诱导促进rgcs死亡程结研究提示bdnftrpc6通道蛋白保护视网膜ir模型诱导rgcs免受损伤游通路trpc通道受抑制时反馈性影响bdnf转录翻译修饰程导致probdnf量累积提高p75ntr受体结合率诱导促进rgcs死亡发现助增进青光眼发病机制认识研究床进行药物干预治疗提供新思路途径
文档香网(httpswwwxiangdangnet)户传
《香当网》用户分享的内容,不代表《香当网》观点或立场,请自行判断内容的真实性和可靠性!
该内容是文档的文本内容,更好的格式请下载文档