选修3复提纲
基工程
1（a）基工程诞生
（）基工程概念
基工程指愿进行严格设计通体外DNA重组转基技术赋予生物新遗传特性创造出更符合需新生物类型生物产品基工程DNA分子水进行设计施工做DNA重组技术
2（a）基工程原理技术
原理：基重组
技术：（）基工程基工具
1分子手术刀——限制性核酸切酶（限制酶）
（1）源：原核生物中分离纯化出
（2）功：够识双链DNA分子某种特定核苷酸序列条链中特定部位两核苷酸间磷酸二酯键断开具专性
（3）结果：限制酶切割产生DNA片段末端通常两种形式：黏性末端末端
2分子缝合针——DNA连接酶
(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶）较：
①相点：缝合磷酸二酯键
②区：E·coliDNA连接酶源T4噬菌体双链DNA片段互补黏性末端间磷酸二酯键连接起T4DNA连接酶缝合两种末端连接末端间效率较低
(2)DNA聚合酶作异 DNA聚合酶单核苷酸加已核苷酸片段末端形成磷酸二酯键DNA连接酶连接两DNA片段末端形成磷酸二酯键
3分子运输车——载体
（1）载体具备条件：①受体细胞中复制稳定保存②具限制酶切点供外源DNA片段插入③具标记基供重组DNA鉴定选择
（2）常载体 质粒种裸露结构简单独立细菌染色体外具复制力双链环状DNA分子
（3）载体： 噬菌体衍生物动植物病毒
(二)基工程基操作程序
第步：目基获取
1目基指： 编码蛋白质结构基
2原核基采取直接分离获真核基工合成工合成目基常方法反转录法_化学合成法_
3PCR技术扩增目基
（1）原理：DNA双链复制
（2）程：第步：加热90～95℃DNA解链第二步：冷55～60℃引物结合互补DNA链第三步：加热70～75℃热稳定DNA聚合酶引物起始互补链合成
第二步：基表达载体构建
1目：目基受体细胞中稳定存遗传代目基够表达发挥作
2组成：目基＋启动子＋终止子＋标记基
（1）启动子：段特殊结构DNA片段位基首端RNA聚合酶识结合部位驱动基转录出mRNA终获需蛋白质
（2）终止子：段特殊结构DNA片段 位基尾端
（3）标记基作：鉴定受体细胞中否含目基含目基细胞筛选出常标记基抗生素基
第三步：目基导入受体细胞_
1转化概念：目基进入受体细胞受体细胞维持稳定表达程
2常转化方法：
目基导入植物细胞：采方法 农杆菌转化法次 基枪法 花粉通道法等
目基导入动物细胞：常方法 显微注射技术方法受体细胞 受精卵
目基导入微生物细胞：
3重组细胞导入受体细胞筛选含基表达载体受体细胞标记基否表达
第四步：目基检测表达
1首先检测 转基生物染色体DNA否插入目基方法采 DNA分子杂交技术
2次检测 目基否转录出mRNA方法采 标记目基作探针mRNA杂交
3检测 目基否翻译成蛋白质方法转基生物中提取 蛋白质相应 抗体进行 抗原－抗体杂交
4时需进行 体生物学水鉴定 转基抗虫植物否出现抗虫性状
（三）（b）基工程应
1植物基工程：抗虫抗病抗逆转基植物利转基改良植物品质
2动物基工程：提高动物生长速度改善畜产品品质转基动物生产药物
3基治疗：正常外源基导入病体该基表达产物发挥作
（四）（a）蛋白质工程概念
蛋白质工程指蛋白质分子结构规律生物功关系作基础通基修饰基合成现蛋白质进行改造制造种新蛋白质满足类生产生活需求（基工程原生产然界已存蛋白质）（1）蛋白质工程崛起缘：基工程生产然界已存蛋白质
（2）蛋白质工程基原理：根需求设计蛋白质结构称第二代基工程
基途径：预期蛋白质功出发设计预期蛋白质结构推测应氨基酸序列找相应脱氧核苷酸序列（基）蛋白质工程特途径基工程般步骤进行（注意：目基工合成方法）
设计中困难：推测非编码区含子脱氧核苷酸序列
二细胞工程
（）植物细胞工程
1理基础（原理）：细胞全性
2植物组织培养技术（b）
（1）程：离体植物器官组织细胞 ―――→愈伤组织 ―――→试苗 ――→植物体
（2）途：微型繁殖作物脱毒制造工种子单倍体育种细胞产物工厂化生产
A 植物繁殖
微型繁殖：高效快速实现种苗量繁殖
作物脱毒：采茎尖组织培养病毒（植物分生区附病毒极少没）
工种子：植物组织培养胚状体定芽顶芽腋芽等材料工薄膜包装种子优点：完全保持优良品种遗传特性受季节限制方便储藏运输
B 作物新品种培育
单倍体育种：
a程：植株（AaBb）通减数分裂花粉（ABAbaBab四种类型）花粉进行花药离体培养（技术植物组织培养）单倍体植株幼苗时期进行秋水仙素处理正常纯合二倍体植株（AABBAAbbaaBBaabb四种类型）
b 优点：明显缩短育种年限
C 突变体利：组织培养中会出现突变体通突变体中选育出新品种（筛选抗病抗盐含高蛋白突变体）
D 细胞产物生产：通够产生利产物细胞进行组织培养够产生量细胞产物
（3）位：培育转基植物植物体细胞杂交培育植物新品种道工序
②
植物细胞A
植物细胞B
杂种细胞
愈伤组织
杂种植株
①
③
④
⑤
图（2）
3植物体细胞杂交技术
（1）程：
（2）诱导融合方法：物理法包括离心振动电刺激等化学法般聚乙二醇（PEG）作诱导剂
（3）意义：克服远缘杂交亲障碍
（二）动物细胞工程
1 动物细胞培养（a）
（1）概念：动物细胞培养动物机体中取出相关组织分散成单细胞然放适宜培养基中细胞生长繁殖
（2）动物细胞培养流程：取动物组织块（动物胚胎幼龄动物器官组织）→剪碎→胰蛋白酶胶原蛋白酶处理分散成单细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁细胞重新胰蛋白酶胶原蛋白酶处理分散成单细胞继续传代培养
（3）细胞贴壁接触抑制：悬液中分散细胞快贴附瓶壁称细胞贴壁细胞数目断增贴壁细胞分裂生长表面相互抑制时细胞会停止分裂增殖种现象称细胞接触抑制
（4）动物细胞培养需满足条件
①菌毒环境：培养液应进行菌处理通常培养液中添加定量抗生素防培养程中污染外应定期更换培养液防止代谢产物积累细胞身造成危害
②营养：合成培养基成分：糖氨基酸促生长子机盐微量元素等通常需加入血清血浆等天然成分
③温度：适宜温度：哺乳动物365℃＋05℃pH：72～74
④气体环境：95空气＋5CO2O2细胞代谢必需CO2作维持培养液pH
（5）动物细胞培养技术应：制备病毒疫苗制备单克隆抗体检测毒物质培养医学研究种细胞
2动物体细胞核移植技术克隆动物
（1）哺乳动物核移植分胚胎细胞核移植（较容易）体细胞核移植（较难）
（2）选核卵(母)细胞原：卵(母)细胞较容易操作卵(母)细胞细胞质营养丰富
（3）体细胞核移植致程：
高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养时采集卵母细胞体外培养减二分裂中期卵母细胞核（显微操作）[注：什卵细胞？提供充足营养操作简便细胞质会抑制细胞核全性表达]供体细胞注入核卵母细胞通电刺激两细胞融合供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎胚胎移入受体（代孕）母牛体生出供体奶牛遗传基相犊牛
（4）体细胞核移植技术应：
①加速家畜遗传改良进程促进良畜群繁育②保护濒危物种增存活数量
③生产珍贵医蛋白④作异种移植供体⑤组织器官移植等
（5）体细胞核移植技术存问题：
克隆动物存着健康问题表现出遗传生理缺陷等
3动物细胞融合
（1）动物细胞融合称细胞杂交指两动物细胞结合形成细胞程融合形成具原两细胞遗传信息单核细胞称杂交细胞
（2）动物细胞融合植物原生质体融合原理基相诱导动物细胞融合方法植物原生质体融合方法类似常诱导素聚乙二醇灭活病毒电刺激等
（3）动物细胞融合意义：克服远缘杂交亲性成研究细胞遗传细胞免疫肿瘤生物生物新品种培育重手段
（4）动物细胞融合植物体细胞杂交较：
细胞工程
植物体细胞杂交
动物细胞融合
理基础
细胞全性细胞膜流动性
细胞增殖细胞膜流动性
融合前处理
酶解法细胞壁（纤维素酶果胶酶）
注射特定抗原免疫处理正常鼠
诱导手段
物理法离心振动电激
化学法：聚乙二醇（PEG）
物理法离心振动电激
化学法：聚乙二醇
生物法：灭活病毒（灭活仙台病毒）
诱导程
第步：原生质体制备
（酶解法）
第二步：原生质体融合
（物化法）
第三步：杂种细胞筛选培养
第四步：杂种植株诱导鉴定
正常鼠免疫处理
动物细胞融合
（物化生法）
杂交瘤细胞筛选培养
专抗体检验阳性细胞培养
单克隆抗体提纯
途意义
克服远缘杂交亲障碍扩展杂交亲组合范围
应：白菜甘蓝等杂种植株
（1） 制备单克隆抗体
（2） 诊断治疗预防疾病例生物导弹治疗癌症
4单克隆抗体
（1）抗体：B淋巴细胞分泌种特异性抗体血清中分离出抗体产量低纯度低特异性差
（2）单克隆抗体制备程：
免疫鼠注射特定抗原蛋白（目鼠产生效应B细胞）提取B淋巴细胞时动物细胞培养方法培养骨髓瘤细胞提取促细胞融合[注：融合结果符合求2B淋巴细胞融合细胞等进行筛选]特定选择培养基筛选出融合杂种细胞[特点迅速量增殖产生专抗体]然进行克隆化培养抗体检测[筛选出够分泌需抗体杂种细胞]杂交瘤细胞体外做规模培养注射入鼠腹腔增殖细胞培养液鼠腹水中量单克隆抗体
（3）杂交瘤细胞特点：量繁殖产生专抗体
（4）单克隆抗体优点：特异性强灵敏度高量制备
（5）单克隆抗体作：作诊断试剂：准确识种抗原物质细微差异定抗原发生特异性结合具准确高效简易快速优点治疗疾病运载药物：治疗癌症治疗制成生物导弹少量治疗疾病
三胚胎工程
（）动物胚胎发育基程
（1）精子发生：补充精原细胞先进行丝分裂进行减数分裂变形程中细胞核精子头部分高尔基体发育顶体中心体演变精子尾线粒体尾基部形成线粒体鞘膜物质浓缩原生质滴直脱落[线粒体精子运动提供量]
（2）卵子发生：胎时期卵原细胞进行丝分裂演变成初级卵母细胞[卵泡细胞包围]减分裂排卵前完成形成次级卵母细胞第极体进入输卵准备受精减二分裂
受精程中完成
（3）受精：精子获（雌性动物生殖道）卵子准备（排出卵子输卵中进步成熟减二中期具备受精力）受精阶段[卵子周围结构外：放射冠透明带卵黄膜]a顶体反应：精子释放顶体酶溶解卵丘细胞间物质穿越放射冠
b透明带反应：顶体酶透明带溶出孔道精子穿入精子触卵黄膜瞬间阻止精子进入透明带生理反应[防止精子入卵受精第道屏障]c卵黄膜封闭作：精子外膜卵黄膜融合精子入卵卵黄膜会拒绝精子进入卵程[防止精子入卵受精第二道屏障]精子尾部脱落原核膜破裂形成雄原核时卵子完成减二分裂形成雌原核[注意：受精标志第二极体形成受精完成标志雌雄原核融合成合子]
（4）胚胎发育：a卵裂期：细胞进行丝分裂数量增加胚胎总体积增加b桑椹胚：32细胞左右胚胎[前细胞发育成完整胚胎潜属全细胞]c囊胚：细胞开始分化中体较细胞细胞团发育成胎种组织滋养层细胞发育成胎膜胎盘胚胎部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚扩会导致透明带破裂胚胎伸展出程孵化]d原肠胚：细胞团表层形成外胚层方细胞形成胚层胚层包围囊腔原肠腔[细胞分化胚胎期达限度]
9 胚胎工程理基础（识记）
（1）胚胎工程概念技术手段：动物早期胚胎配子进行种显微操作处理技术胚胎移植体外受精胚胎分割胚胎干细胞培养等技术
（2）体外受精[属性生殖程]：a卵母细胞采集培养 体型动物促性腺激素处理输卵取卵子（直接受精）体型动物卵巢中采集卵母细胞（体外培养成熟）b精子采集 假阴道法手握法电刺激法获 啮齿动物兔猪等精子培养法（放入工配制获液中）牛羊等精子化学法（放肝素钙离子载体溶液中）
（3）胚胎早期培养：a培养液成分：机盐机盐维生素激素氨基酸核苷酸血清等[注意动物细胞培养液成分较]b胚胎发育适宜阶段时取出受体移植冷冻保存
（4）胚胎移植：a概念：雌性动物早期胚胎移植种生理状态相雌性动物体继续发育新体技术生产胚胎供体孕育胚胎受体繁殖代程通转基核移植体外受精获胚胎必须移植受体获代
b优势：充分发挥雌性优良体繁殖潜力缩短供体身繁殖周期
c胚胎移植生理学基础：种动物供受体生殖器官生理变化相[供体受体进行期发情处理]早期胚胎形成处游离状态胚胎收集提供受体移入子宫外胚胎基发生免疫排斥反应移入受体供体胚胎遗传特性孕育程中受影响
d胚胎移植程序：供受体母牛进行选择激素进行期发情处理供体母牛激素做超数排卵处理选择种优秀公牛配种[性生殖程]胚胎进行收集[时胚胎处游离状态]胚胎进行质量检查[时胚胎应发育桑椹胚囊胚]胚胎移植[冷冻保存]检查受体母牛否受孕产胚胎移植犊牛
（5）胚胎分割：a概念：机械方法早期胚胎切割成248等分等移植获卵双胎胎技术[作动物性繁殖克隆]
b基程：选择良桑椹胚囊胚移入培养皿中分割针分割刀片切开吸出中半胚胎注入透明带中直接移植受体
[注意：细胞团均等分割否会影响胚胎恢复进步发育]
10 胚胎干细胞移植（识记）
（1）胚胎干细胞含义：早期胚胎[囊胚]原始性腺[胎]中分离出类细胞ESEK细胞
（2）特征：形态体积细胞核核仁明显功具发育全性分化成年动物体种组织细胞[体外培养ES细胞增殖分化]
（3）应：治疗类疾病利ES细胞诱导分化成新组织细胞特性移植ES细胞坏死退化部位修复
1胚胎工程指动物早期胚胎配子进行种显微操作处理技术胚胎移植体外受精胚胎分割胚胎干细胞培养等技术处理获胚胎需移植雌性动物体生产代满足类种需求
2动物胚胎发育基程
（1）受精场母体输卵
（2）卵裂期：特点：细胞丝分裂细胞数量断增加胚胎总体体积增加略减
（3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达32左右时胚胎形成致密细胞团形似桑椹全细胞
（4）囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞全性较高）聚集胚胎端体较细胞称细胞团发育成胎种组织中间空腔称囊胚腔
（5）原肠胚：特点：三胚层分化具囊胚腔原肠腔
（二）胚胎干细胞
1哺乳动物胚胎干细胞简称ESEK细胞源早期胚胎原始性腺中分离出
2具胚胎细胞特性形态表现体积细胞核核仁明显功具发育全性分化成年动物体种组织细胞外体外培养条件增殖发生分化进行冷冻保存进行遗传改造
3胚胎干细胞途：①研究哺乳动物体发生发育规律②体外条件研究细胞分化理想材料培养液中加入分化诱导子牛黄酸等化学物质时诱导ES细胞类型组织细胞分化揭示细胞分化细胞凋亡机理提供效手段③治疗类某顽疾帕金森综合症少年糖尿病等④利诱导分化形成新组织细胞特性移植ES细胞坏死退化部位修复恢复正常功⑤着组织工程技术发展通ES细胞体外诱导分化定培育出造组织器官器官移植解决供体器官足器官移植免疫排斥问题
（三）胚胎工程应
1体外受精胚胎早期培养
(1)卵母细胞采集培养：方法：促性腺激素处理排出更卵子然输卵中取卵子直接获精子体外受精第二种方法：刚屠宰母畜卵巢中采集卵母细胞第三种方法助超声波探测仪腹腔镜等直接活体动物卵巢中吸取卵母细胞采集卵母细胞体外工培养成熟获精子受精
(2) 精子采集获：体外受精前精子进行获处理
(3) 受精：获精子培养成熟卵细胞获溶液专受精溶液中完成受精程
(4)胚胎早期培养：精子卵子体外受精应受精卵移入发育培养液中继续培养检查受精状况受精卵发育力培养液成分较复杂机盐机盐外需添加维生素激素氨基酸核苷酸等营养成分血清等物质胚胎发育适宜阶段时取出受体移植冷冻保存动物胚胎移植时间(牛羊般培育桑椹胚囊胚阶段进行移植鼠家兔等实验动物更早阶段移植体外受精胚胎4细胞阶段移植)
2胚胎移植
(1)胚胎移植指雌性动物早期胚胎者通体外受精方式胚胎移植种生理状态相雌性动物体继续发育新体技术中提供胚胎体称供体接受胚胎体称受体（供体优良品种作受体雌性动物应常见存量品种）
位：转基核移植体外受精等项胚胎工程技术生产胚胎必须胚胎移植技术获代胚胎工程道工序
(2) 胚胎移植意义：缩短供体身繁殖周期充分发挥雌性优良体繁殖力
(3) 生理学基础：①动物发情排卵种动物供受体生殖器官生理变化相供体胚胎移入受体提供相生理环境
②早期胚胎定时间处游离状态胚胎收集提供
③受体移入子宫外胚胎发生免疫排斥反应胚胎受体存活提供
④供体胚胎受体子宫建立正常生理组织联系供体胚胎遗传特性孕育程中受影响
(4) 基程序包括：
①供受体选择处理选择遗传特性生产性优秀供体健康体质正常繁殖力受体供体受体物种激素进行期发情处理促性腺激素供体母牛做超数排卵处理
②配种工授精
③胚胎收集检查培养保存配种输精第7天特制卵装置供体母牛子宫胚胎洗出(卵)胚胎进行质量检查时胚胎应发育桑椹胚囊胚阶段直接受体移植放入－196℃液氮中保存
④胚胎进行移植
⑤移植检查受体母牛进行否妊娠检查
3胚胎分割
(1)概念：指采机械方法早期胚胎切割2等份4等份等移植获卵双胎胎技术
(2)意义：胚胎代具相遗传物质属性繁殖
(3)材料：发育良形态正常桑椹胚囊胚（桑椹胚囊胚发育程中细胞开始分化全性高胚胎分割）
(4)操作程：囊胚阶段胚胎分割时细胞团均等分割否会影响分割胚胎恢复进步发育
（四）生物技术安全性伦理问题
1转基生物安全性争 ：
(1)基生物食物安全：
反方观点：反实质性等出现滞效应出现新敏原营养成分改变
正方观点：安全性评价科学家负责态度实例证
(2)转基生物生物安全：生物样性影响
反方观点：扩散种植区外变成野生种类成入侵外物种重组出害病原体成超级杂草造成基污染
正方观点：生命力限存生殖隔离花粉传播距离限花粉存活时间限
(3)转基生物环境安全：生态系统稳定性影响
反方观点：破物种界限二次污染重组出害病原微生物毒蛋白等通食物链进入体
正方观点：改变生物原分类位减少农药保护农田土壤环境
2生物技术伦理问题
(1)克隆：两种观点数持否定态度
否定理：克隆严重违反类伦理道德克隆技术滥克隆击现婚姻家庭两性关系等传统伦理道德观念克隆制造心理社会位健全
肯定理：技术性问题通胚胎分级基诊断染色体检查等方法解决成熟技术通实践成熟
中国政府态度：禁止生殖性克隆反治疗性克隆四原：赞成允许支持接受生殖性克隆实验
(2)试婴：两种目试婴区两种观点数持认态度
否定理：试婴作体零配件工厂生命尊重早期生命活权利抛弃杀死余胚胎异谋杀
肯定理：解决育问题提供骨髓中造血干细胞救治患者快捷方法提供骨髓造血干细胞会试婴造成损伤
(3)基身份证：
否定理：基资讯泄漏造成基歧视势必造成遗传学失业军造成婚姻困难际关系疏远等严重果
肯定理：通基检测早采取预防措施适时进行治疗达挽救患者生命目
3生物武器
(1)种类：致病菌病毒生化毒剂基重组致病菌
(2)散布方式：吸入误食接触带菌物品带菌昆虫叮咬等
(3)特点：致病力强数具传染性传染途径污染面广潜伏期易发现危害时间长等
(4)禁止生物武器公约中国政府态度：情况发展生产储存生物武器反生物武器技术设备扩散
生态工程原理（识记）
（1）生态工程建设目：遵循然界物质循环规律充分发挥资源生产潜力防止环境污染达济效益生态效益步发展
（2）生态济：通实行循环济原系统产出污染物够成系统系统生产原料实现废弃物资源化[实现手段：生态工程]
（3）基原理：物质循环生原理[废弃物农业]
物种样性原理[提高生态系统抵抗力稳定性]
协调衡原理[处理生物环境协调衡考虑环境容纳量]
整体性原理[考虑然系统济系统社会系统统]
系统性工程学原理[系统结构决定功原理：考虑系统部组分间结构通改变优化结构达改善系统功目系统整体性原理：实现总体功部分效果]
16 生态工程实例（识记）
（1）农村综合发展型生态工程：解决问题：农村实现济效益社会效益生态效益全面提高 运原理 物质循环生原理整体性原理物种样性原理
（2）流域综合治理生态工程：解决问题：水土流失情况
运原理 整体性原理协调衡原理等
（3）区域生态系统恢复工程：解决问题：西北区土荒漠化
运原理：协调衡原理生物样性原理等
（4）湿生态恢复工程：解决问题：湿面积缩
湿功：具蓄洪防旱调节区域气候控制土壤侵蚀然净化污水等
处理方法 采工程生物措施相结合废水处理点源非点源污染控制土处理工程等湿恢复
（5）矿区废弃生态恢复工程：解决问题：采矿业造成重金属污染
措施 工制造表土层覆盖特殊隔离植恢复等
（6）城市环境生态工程：解决环境污染问题
措施 进行城市规划合理布局推广环境友技术低污染清洁生产工艺垃圾进行分类处理实现垃圾资源化利等
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基工程
1（a）基工程诞生
（）基工程概念
基工程指愿进行严格设计通体外DNA重组转基技术赋予生物新遗传特性创造出更符合需新生物类型生物产品基工程DNA分子水进行设计施工做DNA重组技术
2（a）基工程原理技术
原理：基重组
技术：（）基工程基工具
1分子手术刀——限制性核酸切酶（限制酶）
（1）源：原核生物中分离纯化出
（2）功：够识双链DNA分子某种特定核苷酸序列条链中特定部位两核苷酸间磷酸二酯键断开具专性
（3）结果：限制酶切割产生DNA片段末端通常两种形式：黏性末端末端
2分子缝合针——DNA连接酶
(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶）较：
①相点：缝合磷酸二酯键
②区：E·coliDNA连接酶源T4噬菌体双链DNA片段互补黏性末端间磷酸二酯键连接起T4DNA连接酶缝合两种末端连接末端间效率较低
(2)DNA聚合酶作异 DNA聚合酶单核苷酸加已核苷酸片段末端形成磷酸二酯键DNA连接酶连接两DNA片段末端形成磷酸二酯键
3分子运输车——载体
（1）载体具备条件：①受体细胞中复制稳定保存②具限制酶切点供外源DNA片段插入③具标记基供重组DNA鉴定选择
（2）常载体 质粒种裸露结构简单独立细菌染色体外具复制力双链环状DNA分子
（3）载体： 噬菌体衍生物动植物病毒
(二)基工程基操作程序
第步：目基获取
1目基指： 编码蛋白质结构基
2原核基采取直接分离获真核基工合成工合成目基常方法反转录法_化学合成法_
3PCR技术扩增目基
（1）原理：DNA双链复制
（2）程：第步：加热90～95℃DNA解链第二步：冷55～60℃引物结合互补DNA链第三步：加热70～75℃热稳定DNA聚合酶引物起始互补链合成
第二步：基表达载体构建
1目：目基受体细胞中稳定存遗传代目基够表达发挥作
2组成：目基＋启动子＋终止子＋标记基
（1）启动子：段特殊结构DNA片段位基首端RNA聚合酶识结合部位驱动基转录出mRNA终获需蛋白质
（2）终止子：段特殊结构DNA片段 位基尾端
（3）标记基作：鉴定受体细胞中否含目基含目基细胞筛选出常标记基抗生素基
第三步：目基导入受体细胞_
1转化概念：目基进入受体细胞受体细胞维持稳定表达程
2常转化方法：
目基导入植物细胞：采方法 农杆菌转化法次 基枪法 花粉通道法等
目基导入动物细胞：常方法 显微注射技术方法受体细胞 受精卵
目基导入微生物细胞：
3重组细胞导入受体细胞筛选含基表达载体受体细胞标记基否表达
第四步：目基检测表达
1首先检测 转基生物染色体DNA否插入目基方法采 DNA分子杂交技术
2次检测 目基否转录出mRNA方法采 标记目基作探针mRNA杂交
3检测 目基否翻译成蛋白质方法转基生物中提取 蛋白质相应 抗体进行 抗原－抗体杂交
4时需进行 体生物学水鉴定 转基抗虫植物否出现抗虫性状
（三）（b）基工程应
1植物基工程：抗虫抗病抗逆转基植物利转基改良植物品质
2动物基工程：提高动物生长速度改善畜产品品质转基动物生产药物
3基治疗：正常外源基导入病体该基表达产物发挥作
（四）（a）蛋白质工程概念
蛋白质工程指蛋白质分子结构规律生物功关系作基础通基修饰基合成现蛋白质进行改造制造种新蛋白质满足类生产生活需求（基工程原生产然界已存蛋白质）（1）蛋白质工程崛起缘：基工程生产然界已存蛋白质
（2）蛋白质工程基原理：根需求设计蛋白质结构称第二代基工程
基途径：预期蛋白质功出发设计预期蛋白质结构推测应氨基酸序列找相应脱氧核苷酸序列（基）蛋白质工程特途径基工程般步骤进行（注意：目基工合成方法）
设计中困难：推测非编码区含子脱氧核苷酸序列
二细胞工程
（）植物细胞工程
1理基础（原理）：细胞全性
2植物组织培养技术（b）
（1）程：离体植物器官组织细胞 ―――→愈伤组织 ―――→试苗 ――→植物体
（2）途：微型繁殖作物脱毒制造工种子单倍体育种细胞产物工厂化生产
A 植物繁殖
微型繁殖：高效快速实现种苗量繁殖
作物脱毒：采茎尖组织培养病毒（植物分生区附病毒极少没）
工种子：植物组织培养胚状体定芽顶芽腋芽等材料工薄膜包装种子优点：完全保持优良品种遗传特性受季节限制方便储藏运输
B 作物新品种培育
单倍体育种：
a程：植株（AaBb）通减数分裂花粉（ABAbaBab四种类型）花粉进行花药离体培养（技术植物组织培养）单倍体植株幼苗时期进行秋水仙素处理正常纯合二倍体植株（AABBAAbbaaBBaabb四种类型）
b 优点：明显缩短育种年限
C 突变体利：组织培养中会出现突变体通突变体中选育出新品种（筛选抗病抗盐含高蛋白突变体）
D 细胞产物生产：通够产生利产物细胞进行组织培养够产生量细胞产物
（3）位：培育转基植物植物体细胞杂交培育植物新品种道工序
②
植物细胞A
植物细胞B
杂种细胞
愈伤组织
杂种植株
①
③
④
⑤
图（2）
3植物体细胞杂交技术
（1）程：
（2）诱导融合方法：物理法包括离心振动电刺激等化学法般聚乙二醇（PEG）作诱导剂
（3）意义：克服远缘杂交亲障碍
（二）动物细胞工程
1 动物细胞培养（a）
（1）概念：动物细胞培养动物机体中取出相关组织分散成单细胞然放适宜培养基中细胞生长繁殖
（2）动物细胞培养流程：取动物组织块（动物胚胎幼龄动物器官组织）→剪碎→胰蛋白酶胶原蛋白酶处理分散成单细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁细胞重新胰蛋白酶胶原蛋白酶处理分散成单细胞继续传代培养
（3）细胞贴壁接触抑制：悬液中分散细胞快贴附瓶壁称细胞贴壁细胞数目断增贴壁细胞分裂生长表面相互抑制时细胞会停止分裂增殖种现象称细胞接触抑制
（4）动物细胞培养需满足条件
①菌毒环境：培养液应进行菌处理通常培养液中添加定量抗生素防培养程中污染外应定期更换培养液防止代谢产物积累细胞身造成危害
②营养：合成培养基成分：糖氨基酸促生长子机盐微量元素等通常需加入血清血浆等天然成分
③温度：适宜温度：哺乳动物365℃＋05℃pH：72～74
④气体环境：95空气＋5CO2O2细胞代谢必需CO2作维持培养液pH
（5）动物细胞培养技术应：制备病毒疫苗制备单克隆抗体检测毒物质培养医学研究种细胞
2动物体细胞核移植技术克隆动物
（1）哺乳动物核移植分胚胎细胞核移植（较容易）体细胞核移植（较难）
（2）选核卵(母)细胞原：卵(母)细胞较容易操作卵(母)细胞细胞质营养丰富
（3）体细胞核移植致程：
高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养时采集卵母细胞体外培养减二分裂中期卵母细胞核（显微操作）[注：什卵细胞？提供充足营养操作简便细胞质会抑制细胞核全性表达]供体细胞注入核卵母细胞通电刺激两细胞融合供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎胚胎移入受体（代孕）母牛体生出供体奶牛遗传基相犊牛
（4）体细胞核移植技术应：
①加速家畜遗传改良进程促进良畜群繁育②保护濒危物种增存活数量
③生产珍贵医蛋白④作异种移植供体⑤组织器官移植等
（5）体细胞核移植技术存问题：
克隆动物存着健康问题表现出遗传生理缺陷等
3动物细胞融合
（1）动物细胞融合称细胞杂交指两动物细胞结合形成细胞程融合形成具原两细胞遗传信息单核细胞称杂交细胞
（2）动物细胞融合植物原生质体融合原理基相诱导动物细胞融合方法植物原生质体融合方法类似常诱导素聚乙二醇灭活病毒电刺激等
（3）动物细胞融合意义：克服远缘杂交亲性成研究细胞遗传细胞免疫肿瘤生物生物新品种培育重手段
（4）动物细胞融合植物体细胞杂交较：
细胞工程
植物体细胞杂交
动物细胞融合
理基础
细胞全性细胞膜流动性
细胞增殖细胞膜流动性
融合前处理
酶解法细胞壁（纤维素酶果胶酶）
注射特定抗原免疫处理正常鼠
诱导手段
物理法离心振动电激
化学法：聚乙二醇（PEG）
物理法离心振动电激
化学法：聚乙二醇
生物法：灭活病毒（灭活仙台病毒）
诱导程
第步：原生质体制备
（酶解法）
第二步：原生质体融合
（物化法）
第三步：杂种细胞筛选培养
第四步：杂种植株诱导鉴定
正常鼠免疫处理
动物细胞融合
（物化生法）
杂交瘤细胞筛选培养
专抗体检验阳性细胞培养
单克隆抗体提纯
途意义
克服远缘杂交亲障碍扩展杂交亲组合范围
应：白菜甘蓝等杂种植株
（1） 制备单克隆抗体
（2） 诊断治疗预防疾病例生物导弹治疗癌症
4单克隆抗体
（1）抗体：B淋巴细胞分泌种特异性抗体血清中分离出抗体产量低纯度低特异性差
（2）单克隆抗体制备程：
免疫鼠注射特定抗原蛋白（目鼠产生效应B细胞）提取B淋巴细胞时动物细胞培养方法培养骨髓瘤细胞提取促细胞融合[注：融合结果符合求2B淋巴细胞融合细胞等进行筛选]特定选择培养基筛选出融合杂种细胞[特点迅速量增殖产生专抗体]然进行克隆化培养抗体检测[筛选出够分泌需抗体杂种细胞]杂交瘤细胞体外做规模培养注射入鼠腹腔增殖细胞培养液鼠腹水中量单克隆抗体
（3）杂交瘤细胞特点：量繁殖产生专抗体
（4）单克隆抗体优点：特异性强灵敏度高量制备
（5）单克隆抗体作：作诊断试剂：准确识种抗原物质细微差异定抗原发生特异性结合具准确高效简易快速优点治疗疾病运载药物：治疗癌症治疗制成生物导弹少量治疗疾病
三胚胎工程
（）动物胚胎发育基程
（1）精子发生：补充精原细胞先进行丝分裂进行减数分裂变形程中细胞核精子头部分高尔基体发育顶体中心体演变精子尾线粒体尾基部形成线粒体鞘膜物质浓缩原生质滴直脱落[线粒体精子运动提供量]
（2）卵子发生：胎时期卵原细胞进行丝分裂演变成初级卵母细胞[卵泡细胞包围]减分裂排卵前完成形成次级卵母细胞第极体进入输卵准备受精减二分裂
受精程中完成
（3）受精：精子获（雌性动物生殖道）卵子准备（排出卵子输卵中进步成熟减二中期具备受精力）受精阶段[卵子周围结构外：放射冠透明带卵黄膜]a顶体反应：精子释放顶体酶溶解卵丘细胞间物质穿越放射冠
b透明带反应：顶体酶透明带溶出孔道精子穿入精子触卵黄膜瞬间阻止精子进入透明带生理反应[防止精子入卵受精第道屏障]c卵黄膜封闭作：精子外膜卵黄膜融合精子入卵卵黄膜会拒绝精子进入卵程[防止精子入卵受精第二道屏障]精子尾部脱落原核膜破裂形成雄原核时卵子完成减二分裂形成雌原核[注意：受精标志第二极体形成受精完成标志雌雄原核融合成合子]
（4）胚胎发育：a卵裂期：细胞进行丝分裂数量增加胚胎总体积增加b桑椹胚：32细胞左右胚胎[前细胞发育成完整胚胎潜属全细胞]c囊胚：细胞开始分化中体较细胞细胞团发育成胎种组织滋养层细胞发育成胎膜胎盘胚胎部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚扩会导致透明带破裂胚胎伸展出程孵化]d原肠胚：细胞团表层形成外胚层方细胞形成胚层胚层包围囊腔原肠腔[细胞分化胚胎期达限度]
9 胚胎工程理基础（识记）
（1）胚胎工程概念技术手段：动物早期胚胎配子进行种显微操作处理技术胚胎移植体外受精胚胎分割胚胎干细胞培养等技术
（2）体外受精[属性生殖程]：a卵母细胞采集培养 体型动物促性腺激素处理输卵取卵子（直接受精）体型动物卵巢中采集卵母细胞（体外培养成熟）b精子采集 假阴道法手握法电刺激法获 啮齿动物兔猪等精子培养法（放入工配制获液中）牛羊等精子化学法（放肝素钙离子载体溶液中）
（3）胚胎早期培养：a培养液成分：机盐机盐维生素激素氨基酸核苷酸血清等[注意动物细胞培养液成分较]b胚胎发育适宜阶段时取出受体移植冷冻保存
（4）胚胎移植：a概念：雌性动物早期胚胎移植种生理状态相雌性动物体继续发育新体技术生产胚胎供体孕育胚胎受体繁殖代程通转基核移植体外受精获胚胎必须移植受体获代
b优势：充分发挥雌性优良体繁殖潜力缩短供体身繁殖周期
c胚胎移植生理学基础：种动物供受体生殖器官生理变化相[供体受体进行期发情处理]早期胚胎形成处游离状态胚胎收集提供受体移入子宫外胚胎基发生免疫排斥反应移入受体供体胚胎遗传特性孕育程中受影响
d胚胎移植程序：供受体母牛进行选择激素进行期发情处理供体母牛激素做超数排卵处理选择种优秀公牛配种[性生殖程]胚胎进行收集[时胚胎处游离状态]胚胎进行质量检查[时胚胎应发育桑椹胚囊胚]胚胎移植[冷冻保存]检查受体母牛否受孕产胚胎移植犊牛
（5）胚胎分割：a概念：机械方法早期胚胎切割成248等分等移植获卵双胎胎技术[作动物性繁殖克隆]
b基程：选择良桑椹胚囊胚移入培养皿中分割针分割刀片切开吸出中半胚胎注入透明带中直接移植受体
[注意：细胞团均等分割否会影响胚胎恢复进步发育]
10 胚胎干细胞移植（识记）
（1）胚胎干细胞含义：早期胚胎[囊胚]原始性腺[胎]中分离出类细胞ESEK细胞
（2）特征：形态体积细胞核核仁明显功具发育全性分化成年动物体种组织细胞[体外培养ES细胞增殖分化]
（3）应：治疗类疾病利ES细胞诱导分化成新组织细胞特性移植ES细胞坏死退化部位修复
1胚胎工程指动物早期胚胎配子进行种显微操作处理技术胚胎移植体外受精胚胎分割胚胎干细胞培养等技术处理获胚胎需移植雌性动物体生产代满足类种需求
2动物胚胎发育基程
（1）受精场母体输卵
（2）卵裂期：特点：细胞丝分裂细胞数量断增加胚胎总体体积增加略减
（3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达32左右时胚胎形成致密细胞团形似桑椹全细胞
（4）囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞全性较高）聚集胚胎端体较细胞称细胞团发育成胎种组织中间空腔称囊胚腔
（5）原肠胚：特点：三胚层分化具囊胚腔原肠腔
（二）胚胎干细胞
1哺乳动物胚胎干细胞简称ESEK细胞源早期胚胎原始性腺中分离出
2具胚胎细胞特性形态表现体积细胞核核仁明显功具发育全性分化成年动物体种组织细胞外体外培养条件增殖发生分化进行冷冻保存进行遗传改造
3胚胎干细胞途：①研究哺乳动物体发生发育规律②体外条件研究细胞分化理想材料培养液中加入分化诱导子牛黄酸等化学物质时诱导ES细胞类型组织细胞分化揭示细胞分化细胞凋亡机理提供效手段③治疗类某顽疾帕金森综合症少年糖尿病等④利诱导分化形成新组织细胞特性移植ES细胞坏死退化部位修复恢复正常功⑤着组织工程技术发展通ES细胞体外诱导分化定培育出造组织器官器官移植解决供体器官足器官移植免疫排斥问题
（三）胚胎工程应
1体外受精胚胎早期培养
(1)卵母细胞采集培养：方法：促性腺激素处理排出更卵子然输卵中取卵子直接获精子体外受精第二种方法：刚屠宰母畜卵巢中采集卵母细胞第三种方法助超声波探测仪腹腔镜等直接活体动物卵巢中吸取卵母细胞采集卵母细胞体外工培养成熟获精子受精
(2) 精子采集获：体外受精前精子进行获处理
(3) 受精：获精子培养成熟卵细胞获溶液专受精溶液中完成受精程
(4)胚胎早期培养：精子卵子体外受精应受精卵移入发育培养液中继续培养检查受精状况受精卵发育力培养液成分较复杂机盐机盐外需添加维生素激素氨基酸核苷酸等营养成分血清等物质胚胎发育适宜阶段时取出受体移植冷冻保存动物胚胎移植时间(牛羊般培育桑椹胚囊胚阶段进行移植鼠家兔等实验动物更早阶段移植体外受精胚胎4细胞阶段移植)
2胚胎移植
(1)胚胎移植指雌性动物早期胚胎者通体外受精方式胚胎移植种生理状态相雌性动物体继续发育新体技术中提供胚胎体称供体接受胚胎体称受体（供体优良品种作受体雌性动物应常见存量品种）
位：转基核移植体外受精等项胚胎工程技术生产胚胎必须胚胎移植技术获代胚胎工程道工序
(2) 胚胎移植意义：缩短供体身繁殖周期充分发挥雌性优良体繁殖力
(3) 生理学基础：①动物发情排卵种动物供受体生殖器官生理变化相供体胚胎移入受体提供相生理环境
②早期胚胎定时间处游离状态胚胎收集提供
③受体移入子宫外胚胎发生免疫排斥反应胚胎受体存活提供
④供体胚胎受体子宫建立正常生理组织联系供体胚胎遗传特性孕育程中受影响
(4) 基程序包括：
①供受体选择处理选择遗传特性生产性优秀供体健康体质正常繁殖力受体供体受体物种激素进行期发情处理促性腺激素供体母牛做超数排卵处理
②配种工授精
③胚胎收集检查培养保存配种输精第7天特制卵装置供体母牛子宫胚胎洗出(卵)胚胎进行质量检查时胚胎应发育桑椹胚囊胚阶段直接受体移植放入－196℃液氮中保存
④胚胎进行移植
⑤移植检查受体母牛进行否妊娠检查
3胚胎分割
(1)概念：指采机械方法早期胚胎切割2等份4等份等移植获卵双胎胎技术
(2)意义：胚胎代具相遗传物质属性繁殖
(3)材料：发育良形态正常桑椹胚囊胚（桑椹胚囊胚发育程中细胞开始分化全性高胚胎分割）
(4)操作程：囊胚阶段胚胎分割时细胞团均等分割否会影响分割胚胎恢复进步发育
（四）生物技术安全性伦理问题
1转基生物安全性争 ：
(1)基生物食物安全：
反方观点：反实质性等出现滞效应出现新敏原营养成分改变
正方观点：安全性评价科学家负责态度实例证
(2)转基生物生物安全：生物样性影响
反方观点：扩散种植区外变成野生种类成入侵外物种重组出害病原体成超级杂草造成基污染
正方观点：生命力限存生殖隔离花粉传播距离限花粉存活时间限
(3)转基生物环境安全：生态系统稳定性影响
反方观点：破物种界限二次污染重组出害病原微生物毒蛋白等通食物链进入体
正方观点：改变生物原分类位减少农药保护农田土壤环境
2生物技术伦理问题
(1)克隆：两种观点数持否定态度
否定理：克隆严重违反类伦理道德克隆技术滥克隆击现婚姻家庭两性关系等传统伦理道德观念克隆制造心理社会位健全
肯定理：技术性问题通胚胎分级基诊断染色体检查等方法解决成熟技术通实践成熟
中国政府态度：禁止生殖性克隆反治疗性克隆四原：赞成允许支持接受生殖性克隆实验
(2)试婴：两种目试婴区两种观点数持认态度
否定理：试婴作体零配件工厂生命尊重早期生命活权利抛弃杀死余胚胎异谋杀
肯定理：解决育问题提供骨髓中造血干细胞救治患者快捷方法提供骨髓造血干细胞会试婴造成损伤
(3)基身份证：
否定理：基资讯泄漏造成基歧视势必造成遗传学失业军造成婚姻困难际关系疏远等严重果
肯定理：通基检测早采取预防措施适时进行治疗达挽救患者生命目
3生物武器
(1)种类：致病菌病毒生化毒剂基重组致病菌
(2)散布方式：吸入误食接触带菌物品带菌昆虫叮咬等
(3)特点：致病力强数具传染性传染途径污染面广潜伏期易发现危害时间长等
(4)禁止生物武器公约中国政府态度：情况发展生产储存生物武器反生物武器技术设备扩散
生态工程原理（识记）
（1）生态工程建设目：遵循然界物质循环规律充分发挥资源生产潜力防止环境污染达济效益生态效益步发展
（2）生态济：通实行循环济原系统产出污染物够成系统系统生产原料实现废弃物资源化[实现手段：生态工程]
（3）基原理：物质循环生原理[废弃物农业]
物种样性原理[提高生态系统抵抗力稳定性]
协调衡原理[处理生物环境协调衡考虑环境容纳量]
整体性原理[考虑然系统济系统社会系统统]
系统性工程学原理[系统结构决定功原理：考虑系统部组分间结构通改变优化结构达改善系统功目系统整体性原理：实现总体功部分效果]
16 生态工程实例（识记）
（1）农村综合发展型生态工程：解决问题：农村实现济效益社会效益生态效益全面提高 运原理 物质循环生原理整体性原理物种样性原理
（2）流域综合治理生态工程：解决问题：水土流失情况
运原理 整体性原理协调衡原理等
（3）区域生态系统恢复工程：解决问题：西北区土荒漠化
运原理：协调衡原理生物样性原理等
（4）湿生态恢复工程：解决问题：湿面积缩
湿功：具蓄洪防旱调节区域气候控制土壤侵蚀然净化污水等
处理方法 采工程生物措施相结合废水处理点源非点源污染控制土处理工程等湿恢复
（5）矿区废弃生态恢复工程：解决问题：采矿业造成重金属污染
措施 工制造表土层覆盖特殊隔离植恢复等
（6）城市环境生态工程：解决环境污染问题
措施 进行城市规划合理布局推广环境友技术低污染清洁生产工艺垃圾进行分类处理实现垃圾资源化利等
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