附件1
EB病毒核酸检测试剂注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请EB病毒核酸检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原针EB病毒核酸检测试剂技术审查般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需详细阐明理科学合理性进行验证提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
EB病毒（Epstein－Barr virusEBV）疱疹病毒科疱疹病毒IV型种嗜类淋巴细胞疱疹病毒EBV双链DNA病毒基组长约172kb病毒颗粒中呈线性分子进入受感染细胞DNA发生环化复制淋巴细胞中潜伏感染EBV表达2种翻译成蛋白质RNA（EBVencoded RNAsEBERs）包括EBER1EBER26种核抗原（EBNA1EBNA2EBNA3AEBNA3BEBNA3CLP）2种潜伏期膜蛋白（潜伏膜蛋白latent membrane proteinLMP）包括LMP1LMP2AB
EBV群中感染非常普遍原发性EBV感染致传染性单核细胞增症外EBV引起慢性活动性EBV感染EBV相关噬血细胞性淋巴组织细胞增生症等非肿瘤性重症EBV相关疾病EBV许肿瘤诊疗相关针EBV感染相关疾病选择适床标实验室检测方法EBV感染相关疾病诊断治疗十分重
指导原述EB病毒核酸检测试剂指基分子生物学相关方法核酸检测技术EB病毒核酸序列检测靶标体样（全血血浆血清等）中EB病毒进行体外定量检测试剂结合床表现实验室指标类产品EB病毒感染实验室诊断床应
指导原适基实时荧光PCR（Realtime polymerase chain reactionqPCR）等核酸检测方法EB病毒核酸检测试剂EB病毒定性检测方法部分求完全适文述容够全面申请根产品特性适部分进行评价补充评价资料进行相应性验证需阐述适理说明代方法科学合理性
指导原适进行产品注册相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重方法学病原体检出力等方面写明拟申报产品目前市场已获批准类产品间区类申报产品应着重样类型样采集制备方式目标基片段选择方法学特征等方面描述
（二）原材料研究资料
类产品原材料应包括EB病毒检测试剂组成成分引物探针酶提取成分等申请行研制原材料申请应EB病毒目基序列确定引物探针选择酶选择验证等实验程予详述提供原材料性研究资料：外观纯度蛋白浓度功性研究等制备完成原料成品应进行质量检验确认符合标准求整生产工艺应稳定控申请外购原材料应详述原材料外购方源提交外购方出具原材料性指标质量控制资料详述申请外购原材料指标质量求确定该原材料作产品原材料详细
1核酸分离纯化组分（）组成原理介绍相关验证资料
2PCR组分原料（包括引物探针种酶原料）选择制备质量标准实验研究资料包括容：
21脱氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸组成成分包括：dATPdUTPdGTPdCTPdTTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料
22引物
定数量dNTP构成特定序列通常采DNA合成仪工合成合成聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜方法纯化序列准确性纯度稳定性功性实验等验证外购应提供合成机构出具合成产物质检证明聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）结果高效液相色谱法（HPLC）分析图谱
23探针
特定带示踪物（标记物）已知核酸片段（寡聚核苷酸片段）互补核酸序列退火杂交特定核酸序列探测合成PAGE适宜方法纯化5＇端（3＇端）进行标记HPLC适宜方法纯化纯度应达HPLC纯应提供合成机构出具合成产物质检证明HPLC分析图谱应探针分子量纯度标记荧光基团进行核实进行功性试验验证
24酶
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性：94℃保温1时保持50活性尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性逆转录酶具逆转录酶活性核酸切酶活性应酶活性进行合理验证
3核酸类检测试剂包装材料耗材应脱氧核糖核酸酶（DNase）核糖核酸酶（RNase）污染
4企业部参考品：
企业部参考品保证产品性稳定性检测值溯源重构成参考品研究应包括原料选择制备程定值研究评价指标统计学分析等建议采灭活病毒床样细胞培养病毒株建立参考品溯源国际参考物质国家参考品（）宜质粒标设置应合理阴阳性质控品宜采混合床样病毒株假病毒制备试剂盒中包含定量标准品采床样病毒株假病毒质粒等制备
（标）抑制造成假阴性结果进行质控申请应标引物探针模板浓度做精确验证保证标荧光通道呈明显阳性曲线应目基检测造成竞争性抑制导致假阴性标Ct应明确范围求
阴阳性质控品应参样核酸行提取整PCR反应程试剂设备交叉污染等环节进行合理质量控制企业应种质控品Ct做出明确范围求
企业应提交详细溯源性研究资料企业制备企业部参考品商品化校准品均应够溯源国际参考物质国家参考品（）
（三）生产工艺反应体系研究资料
基生产工艺包括：配制工作液半成品检定分装包装配制工作液种原材料配应符合求原材料应混合均匀配制程应pH等关键参数进行效控制
生产工艺研究资料应反应体系涉基容样类型样量试剂量反应条件校准方法质控方法稳定性效期提供确切包括容：
1生产工艺介绍图表方式表示
2DNA提取纯化方法优化建议包含纯化步骤标质控品均应全程参提取纯化
3确定佳PCR反应体系研究资料包括酶浓度引物探针浓度dNTP浓度阳离子浓度样量加样量反应体积等
4确定PCR阶段温度时间循环数研究资料
5基线阈值（threshold）阈值循环数（Ct）确定研究资料
6适机型反应条件分析果差异应分详述
（四）分析性研究资料
申请应提交生产者产品研制成品验证阶段试剂盒进行性验证研究资料项分析性评价应包括具体研究目实验设计研究方法接受标准实验数统计方法等详细资料关分析性验证背景信息应申报资料中体现包括实验点（实验室）适仪器试剂规格批号床样源等分析性评价实验方法参考相关美国床实验室标准化协会批准指南（CLSIEP）文件国关体外诊断产品性评估指导原进行建议着重分析性进行研究
1EB DNA提取
病毒DNA提取目：富集目基浓度保证目基序列完整性增加PCR模板溶液均性PCR抑制物决定PCR成败关键环节申报产品否含DNA分离纯化组分企业应核酸提取环节做详细验证床标中含式样PCR抑制物DNA提取试剂选择量分离出目DNA外应纯化步骤PCR抑制物目前常见DNA分离纯化方法改良方法优势足申请应结合申报产品特性合理选择DNA分离纯化试剂提供详细验证资料（提取效率续试验配合等）
2低检出限定量限（分析灵敏度）
（1）低检出限定量限确定
建议国际参考物质国家参考品（）进行梯度稀释次检测建议采95（n≥20）阳性检出率作低检测限确定标准
定量限应高等检出限次（少20次）测量结果符合试剂准确度求低病毒水作定量限
（2）低检出限定量限验证
申报试剂应低检出限接低检出限定量限病毒浓度进行验证
企业应够提供低检出限定量限验证病毒株源浓度确认试验等信息样类型（涉）应分评价低检出限定量限
3线性范围
线性范围确定研究应高值床样病毒株定浓度加入血液基质中（溯源国际参考物质国家参考品（）方法定量）进行梯度稀释稀释液应确认阴性混合血液样应包含少9浓度（应包含接低检测限界值浓度）少3批次试剂进行试验通评价定范围线性关系水准确度确定该产品线性范围样类型（涉）应分评价线性范围
4准确度
应国际参考物质国家参考品（）企业部参考品床样进行阳性阴性符合率者方法学研究
5精密度
应影响检测精密度变量进行验证评估重复性重现性包括运行变异运行间日日间批次间操作者间仪器间点间变异
建议设定合理精密度评价周期例期12天检测天2完成少2次完整检测注意应包括核酸分离纯化步骤采床样进行试验少包含3浓度水：阴性样略高低检测限弱阳性样中等阳性样
6特异性
（1）交叉反应
①EB DNA检测试剂交叉反应验证病原体种类考虑方面性：核酸序列具源性易引起相相似床症状（推荐种类见表1）
②建议病毒细菌感染医学相关水进行交叉反应验证通常细菌感染水106 cfumL更高病毒105 pfumL更高
③申请应提供交叉反应验证病毒细菌源种属型浓度确认等试验资料关交叉反应验证信息应列表方式产品说明书产品性指标项中体现
表1 交叉反应研究微生物（推荐）
微生物
水痘带状疱疹病毒（类疱疹病毒3型）
类免疫缺陷病毒*
乙型肝炎病毒
梅毒*
巨细胞病毒（类疱疹病毒5型）
疱疹病毒6型
疱疹病毒7型
疱疹病毒8型
单纯疱疹病毒1型（类疱疹病毒1型）
单纯疱疹病毒2型（类疱疹病毒2型）
甲型流感病毒*
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
腺病毒*
*选验证交叉反应病原体
（2）干扰物质
应针样类型分评价存干扰情况建议种干扰物质潜浓度（差条件）进行评价测物医学决定水进行检测潜干扰物质包括源性外源性已报道干扰物质
样应少选取全血（血红蛋白白细胞）白蛋白胆红素甘油三酯身抗体等进行验证注明测物产生干扰高限值
7需注意问题
适机型产品应提供产品说明书适机型项中列型号仪器性评估资料适样类型应提交样类型致性验证包括抗凝剂采血（涉）验证
（五）阳性判断值研究资料
申请应考虑理区域流行病学背景口统计学特征（包括性域种族等素）差异选择具代表性样建立阳性判断值注意应纳入定数量弱阳性样采研究方法应说明合理性
荧光实时PCR方法结果判读Ct值核酸浓度确定资料包括确定基线阈值（threshold）阈值循环数（Ct）核酸浓度（适）研究资料等
外建议申请考虑建立阳性判断值时受试者样目标群代表性通床评价进步验证确认阳性判断值准确性
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料涉两部分容申报试剂稳定性适样稳定性研究前者包括实时稳定性（效期）运输稳定性开瓶稳定性冻融次数限制等研究申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结实时稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
应样稳定性进行研究包括冷藏冷冻等条件效期验证合理温度范围选择温度点（温度范围）间隔定时间段储存样进行性分析验证确认类型样效期稳定性适冷冻保存样应冻融次数进行评价
试剂稳定性样稳定性两部分容研究结果均应说明书储存条件效期样求两项中进行详细说明
（七）床评价资料
床试验开展方案制定报告撰写等均应符合相关法规体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求
1试验方法
EB病毒核酸检测试剂言床试验采试验体外诊断试剂床普遍认质量较已市类产品进行较研究试验证明两者具等效性间接证明试验体外诊断试剂床性够满足预期途求试剂预期途适群样类型检测性等方面应试验体外诊断试剂具较性
较研究试验中测定结果符样应采床检验实验室已建立参考方法者合理方法（第三方试剂核酸序列测定方法等）进行复核
2试验机构
应考虑拟申报产品特点预期途结合流行病学背景选择具定域代表性试验机构受试者原应具分子生物学方法检测相关学科优势实验操作员足够时间熟悉检测系统环节熟悉评价方案
3试验方案
床试验实施前研究员应设计科学合理床研究方案床研究机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动
受试群应全面代表预期适群体外诊断试剂较研究试验中应受试者样设盲检测序机避免操作者检测结果评价者知晓受试者疾病诊断试剂检测结果等信息引入偏倚
试验体外诊断试剂检测应试剂检测步进行避免疾病进程样采集时间造成床试验结偏离真值床试验机构床试验中应统试验操作判读标准等
应明确统计检验假设评价试验体外诊断试剂试剂否等效标准提出适合数统计分析方法建议根预实验结果检测样类型数量提出求
4受试者
EB病毒核酸检测应床症状体征诊断方法相结合EB病毒感染辅助诊断治疗监测等床试验受试者应包括种接受EB病毒核酸感染检查群原发性EB病毒感染相关疾病（传染性单核细胞增症等）慢性活动性EB病毒感染EB病毒感染相关恶性肿瘤（鼻咽癌等）免疫功低（器官移植患者等）者接受免疫抑制剂治疗等群外建议根流行病学证纳入区患者群验证产品床检出力
5样分布
建议少原发性EB病毒感染慢性EB病毒感染EB病毒感染相关恶性肿瘤免疫功低者接受免疫抑制剂治疗等群中均应检测出具EB病毒阳性床结果
中阳性样应包含定数量弱阳性样灰区样检测范围水均分布病例选择时考虑具床症状体征患者等阴性样考虑存交叉反应情况应选择类疱疹病毒感染患者床角度考察特异性
床试验中涉样类型应实际床检测中常样类型时够检测血清血浆样试剂应EB病毒感染患者分采集血清血浆样进行试验研究阳性样应包括强中弱阳性部分阴性样床研究应前瞻性样采回顾性样应行说明
6样量
适样量保证体外诊断试剂床性准确评价必条件床试验样量应满足统计学求采适统计学方法进行估算根预期途设计相应床试验辅助诊断途例床试验试验体外诊断试剂相试剂阴阳性符合率分估算低阴阳性样例数
床样量估算建议采样量公式计算
公式中n样量Z1αZ1β显著性水握度标准正态分布分数位P0评价指标床接受标准PT试验体外诊断试剂评价指标预期值
中阴阳性符合率床接受标准（P0）建议低95获床试验数证明产品相方法阴阳性符合率（置信区间限）低预设床接受标准（P0）评价指标P接100时述样量估算方法适应考虑选择更加适宜方法进行样量估算统计学分析精确概率法等
7统计学分析
床试验结果统计应选择合适统计方法类产品实验等效性研究常相关性线性回相关系数（r）等检测结果进行统计分析考察两组数间否存相关性统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设评价考核试剂试剂否等效标准选择交叉四格表形式总结两种试剂定性检测结果检验结果进行符合率分析计算阳性符合率阴性符合率总符合率Kappa值等指标信区间
8结果符样
数收集程中两种试剂检测结果致样应进行第三方复核结合受试者床诊断信息差异原进行分析第三方复核结果应纳入统计分析需复核应详细说明理
（八）产品技术求
申请应原材料质量生产工艺稳定前提根申请产品研制前期床评价等结果国家标准行业标准相关文献医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）关求编写产品技术求
果申报试剂已适国家标准品参考品发布申请应产品技术求中提出检验求
办法规定类产品第三类体外诊断试剂申请应医疗器械产品技术求编写指导原规定附录形式明确原材料生产工艺半成品求附录编制应符合相关编写规范求原材料部分建议包括目标物基位点区域引物探针设计源（包括目标物）种酶源技术指标验收标准质控品设置验证情况等容
（九）产品检验报告
应产品技术求符合办法求医疗器械检验机构进行连续3生产批次样品检验提供检验合格报告
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途标采集处理检验方法检验结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书格式应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求进口体外诊断试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致性翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书中相关技术容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致某容引参考文献应规范格式容进行标注单独列明文献相关信息
面EB病毒核酸检测试剂说明书重点容进行详细说明
1．预期途
应少包括容：
11试剂盒定量检测体样（全血血浆血清等）中EB DNA适样类型应申报产品分析性评估床研究情况进行确认
12目标物特征：简描述病原体生物学特征致病性感染床表现相关实验室诊断方法等
13目标群：种接受EB病毒核酸感染检查群例原发性EB病毒感染慢性EB病毒感染EB病毒感染相关恶性肿瘤免疫功低者接受免疫抑制剂治疗等群注：未述目标群进行相关床研究产品应项声明：未做相关验证产品相关床预期群
14产品功：结合目标群床表现诊断指标EB病毒感染辅助诊断治疗监测等
2检验原理
21 描述试剂盒检测够覆盖目标基序列特征引物探针设计反应体系（）组合形式质控品设置荧光信号标记等
22 描述核酸提取纯化方法原理等
23 描述试剂盒技术原理结合图示进行说明反应体系中添加相关防止扩增产物污染组分（尿嘧啶DNA糖基化酶）应介绍作机理
3组成成分
31详细说明试剂盒组分名称数量成分浓度等信息含生物源性物质应说明生物学源活性特性说明批号试剂盒中组分否互换
32 果试剂盒中包含核酸分离纯化试剂组分应明确验证推荐配合核酸分离纯化试剂盒生产企业产品名称注册证号（）配合仪器等信息
33试剂盒中包含该项检测必需组分应列出相关试剂生产企业产品名称备案证号注册证号（）等信息
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性开封稳定性复溶稳定性运输稳定性冻融次数求等应标明具体储存条件效期
5适机型
注明适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
6样求
61样收集求：结合床公认推荐采样求
62血液样应说明采血抗凝剂求：明确样类型采血抗凝剂样应说明样采集处理保存方式
63样处理运送保存：血液样离心条件求核酸提取前预处理运送条件保存条件期限（短期长期）等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数求需应高检测范围样稀释方法进行规定
7检验方法
描述动分析工作流程者详细说明试验操作步骤例：
71试剂准备配制方法注意事项
72详细描述测样质控品核酸提取纯化方法包括条件步骤注意事项
73扩增反应前准备：加样体积序等
74 PCR阶段温度时间设置循环设置注意事项
75仪器设置：特殊参数结合探针荧光素标记情况设置目标基标荧光通道
76基线循环阈值（Ct值）选择方法
77质量控制方法：试剂盒阴阳性质控品标Ct值范围求
8检验结果解释
结合阳性阴性（标）目标基检测结果列表形式详细描述出现结果组合相应解释Ct值表示存灰区应时说明灰区结果处理方式包括种情况需进行重复检测重复检测方法样采取优化条件（采集求采集方法）等适结合扩增结果S形曲线灰区结果进行判定
9．检验方法局限性
91试剂盒检测结果应结合患者症状体征病史实验室诊断结果等情况进行综合分析解释作患者床诊治理唯
92导致假阴性假阳性结果性分析：
921合理样采集处理运输保存条件样中目标物滴度低
922EB病毒核酸目标基序列变异原导致序列改变
923患者时间部位者次采集样会降低假阴性结果性
924未验证干扰源性外源引入样物质
925样间交叉污染
926未验证交叉反应物质
10产品性指标详述性指标：
101低检出限定量限：说明试剂样类型低检出浓度低定量浓度简单介绍低检出限定量限确定验证方法
102线性范围：确定线性范围方法浓度范围相关系数等信息
103精密度：说明类型样重复性重现性评价结果
104分析特异性：包括交叉反应干扰物质
1041产生交叉反应病原体验证情况建议列表方式描述病原体名称型浓度等信息
1042样中常见干扰物质检测结果影响应注明接受高限值
105床试验：简介绍试验方法受试者样试验结果结等
11注意事项应少包括容：
（1）关源组分（）警告：试剂盒校准品质控品含源物质组分已通乙型肝炎表面抗原（HbsAg）类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV12）丙型肝炎抗体（抗HCV）等项目检测阴性截目前没项检测确保绝安全应组分作潜传染源
（2）床实验室应严格床基扩增实验室工作规范配备设备操作员应严格说明书求进行操作
三参考文献
1国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册理办法（局令第5号）2014年7月
2国家食品药品监督理总局体外诊断试剂床试验技术指导原2014年9月
3国家食品药品监督理总局体外诊断试剂说明书编写指导原2014年9月
4国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式2014年9月
5全国童EB病毒感染协作组EB病毒感染实验室诊断床应专家识 中华实验床病毒学杂志20182（32）：28
6中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会鼻咽癌标志物专家委员会鼻咽癌标志物床应专家识中国癌症防治杂志20116（11） ：183193
四起草单位
国家药品监督理局医疗器械技术审评中心
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EB病毒核酸检测试剂注册技术审查指导原
指导原旨指导注册申请EB病毒核酸检测试剂注册申报资料准备撰写时技术审评部门注册申报资料技术审评提供参考
指导原针EB病毒核酸检测试剂技术审查般求申请应产品具体特性确定中容否适适需具体阐述理相应科学产品具体特性注册申报资料容进行充实细化
指导原申请审查员指导性文件包括注册审批涉行政事项作法规强制执行果够满足相关法规求方法采需详细阐明理科学合理性进行验证提供详细研究资料验证资料相关员应遵循相关法规前提指导原
指导原现行法规标准体系前认知水制定着法规标准断完善科学技术断发展指导原相关容适时进行调整
适范围
EB病毒（Epstein－Barr virusEBV）疱疹病毒科疱疹病毒IV型种嗜类淋巴细胞疱疹病毒EBV双链DNA病毒基组长约172kb病毒颗粒中呈线性分子进入受感染细胞DNA发生环化复制淋巴细胞中潜伏感染EBV表达2种翻译成蛋白质RNA（EBVencoded RNAsEBERs）包括EBER1EBER26种核抗原（EBNA1EBNA2EBNA3AEBNA3BEBNA3CLP）2种潜伏期膜蛋白（潜伏膜蛋白latent membrane proteinLMP）包括LMP1LMP2AB
EBV群中感染非常普遍原发性EBV感染致传染性单核细胞增症外EBV引起慢性活动性EBV感染EBV相关噬血细胞性淋巴组织细胞增生症等非肿瘤性重症EBV相关疾病EBV许肿瘤诊疗相关针EBV感染相关疾病选择适床标实验室检测方法EBV感染相关疾病诊断治疗十分重
指导原述EB病毒核酸检测试剂指基分子生物学相关方法核酸检测技术EB病毒核酸序列检测靶标体样（全血血浆血清等）中EB病毒进行体外定量检测试剂结合床表现实验室指标类产品EB病毒感染实验室诊断床应
指导原适基实时荧光PCR（Realtime polymerase chain reactionqPCR）等核酸检测方法EB病毒核酸检测试剂EB病毒定性检测方法部分求完全适文述容够全面申请根产品特性适部分进行评价补充评价资料进行相应性验证需阐述适理说明代方法科学合理性
指导原适进行产品注册相关许事项变更产品
二注册申报资料求
（）综述资料
综述资料包括产品预期途产品描述关生物安全性说明研究结果总结评价类产品市情况介绍等容中类产品市情况介绍部分应着重方法学病原体检出力等方面写明拟申报产品目前市场已获批准类产品间区类申报产品应着重样类型样采集制备方式目标基片段选择方法学特征等方面描述
（二）原材料研究资料
类产品原材料应包括EB病毒检测试剂组成成分引物探针酶提取成分等申请行研制原材料申请应EB病毒目基序列确定引物探针选择酶选择验证等实验程予详述提供原材料性研究资料：外观纯度蛋白浓度功性研究等制备完成原料成品应进行质量检验确认符合标准求整生产工艺应稳定控申请外购原材料应详述原材料外购方源提交外购方出具原材料性指标质量控制资料详述申请外购原材料指标质量求确定该原材料作产品原材料详细
1核酸分离纯化组分（）组成原理介绍相关验证资料
2PCR组分原料（包括引物探针种酶原料）选择制备质量标准实验研究资料包括容：
21脱氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸组成成分包括：dATPdUTPdGTPdCTPdTTP应提交纯度浓度保存稳定性等验证资料
22引物
定数量dNTP构成特定序列通常采DNA合成仪工合成合成聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜方法纯化序列准确性纯度稳定性功性实验等验证外购应提供合成机构出具合成产物质检证明聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）结果高效液相色谱法（HPLC）分析图谱
23探针
特定带示踪物（标记物）已知核酸片段（寡聚核苷酸片段）互补核酸序列退火杂交特定核酸序列探测合成PAGE适宜方法纯化5＇端（3＇端）进行标记HPLC适宜方法纯化纯度应达HPLC纯应提供合成机构出具合成产物质检证明HPLC分析图谱应探针分子量纯度标记荧光基团进行核实进行功性试验验证
24酶
DNA聚合酶应具DNA聚合酶活性核酸切酶活性具热稳定性：94℃保温1时保持50活性尿嘧啶DNA糖基化酶（UDGUNG）具水解尿嘧啶糖苷键活性核酸外切酶核酸切酶活性逆转录酶具逆转录酶活性核酸切酶活性应酶活性进行合理验证
3核酸类检测试剂包装材料耗材应脱氧核糖核酸酶（DNase）核糖核酸酶（RNase）污染
4企业部参考品：
企业部参考品保证产品性稳定性检测值溯源重构成参考品研究应包括原料选择制备程定值研究评价指标统计学分析等建议采灭活病毒床样细胞培养病毒株建立参考品溯源国际参考物质国家参考品（）宜质粒标设置应合理阴阳性质控品宜采混合床样病毒株假病毒制备试剂盒中包含定量标准品采床样病毒株假病毒质粒等制备
（标）抑制造成假阴性结果进行质控申请应标引物探针模板浓度做精确验证保证标荧光通道呈明显阳性曲线应目基检测造成竞争性抑制导致假阴性标Ct应明确范围求
阴阳性质控品应参样核酸行提取整PCR反应程试剂设备交叉污染等环节进行合理质量控制企业应种质控品Ct做出明确范围求
企业应提交详细溯源性研究资料企业制备企业部参考品商品化校准品均应够溯源国际参考物质国家参考品（）
（三）生产工艺反应体系研究资料
基生产工艺包括：配制工作液半成品检定分装包装配制工作液种原材料配应符合求原材料应混合均匀配制程应pH等关键参数进行效控制
生产工艺研究资料应反应体系涉基容样类型样量试剂量反应条件校准方法质控方法稳定性效期提供确切包括容：
1生产工艺介绍图表方式表示
2DNA提取纯化方法优化建议包含纯化步骤标质控品均应全程参提取纯化
3确定佳PCR反应体系研究资料包括酶浓度引物探针浓度dNTP浓度阳离子浓度样量加样量反应体积等
4确定PCR阶段温度时间循环数研究资料
5基线阈值（threshold）阈值循环数（Ct）确定研究资料
6适机型反应条件分析果差异应分详述
（四）分析性研究资料
申请应提交生产者产品研制成品验证阶段试剂盒进行性验证研究资料项分析性评价应包括具体研究目实验设计研究方法接受标准实验数统计方法等详细资料关分析性验证背景信息应申报资料中体现包括实验点（实验室）适仪器试剂规格批号床样源等分析性评价实验方法参考相关美国床实验室标准化协会批准指南（CLSIEP）文件国关体外诊断产品性评估指导原进行建议着重分析性进行研究
1EB DNA提取
病毒DNA提取目：富集目基浓度保证目基序列完整性增加PCR模板溶液均性PCR抑制物决定PCR成败关键环节申报产品否含DNA分离纯化组分企业应核酸提取环节做详细验证床标中含式样PCR抑制物DNA提取试剂选择量分离出目DNA外应纯化步骤PCR抑制物目前常见DNA分离纯化方法改良方法优势足申请应结合申报产品特性合理选择DNA分离纯化试剂提供详细验证资料（提取效率续试验配合等）
2低检出限定量限（分析灵敏度）
（1）低检出限定量限确定
建议国际参考物质国家参考品（）进行梯度稀释次检测建议采95（n≥20）阳性检出率作低检测限确定标准
定量限应高等检出限次（少20次）测量结果符合试剂准确度求低病毒水作定量限
（2）低检出限定量限验证
申报试剂应低检出限接低检出限定量限病毒浓度进行验证
企业应够提供低检出限定量限验证病毒株源浓度确认试验等信息样类型（涉）应分评价低检出限定量限
3线性范围
线性范围确定研究应高值床样病毒株定浓度加入血液基质中（溯源国际参考物质国家参考品（）方法定量）进行梯度稀释稀释液应确认阴性混合血液样应包含少9浓度（应包含接低检测限界值浓度）少3批次试剂进行试验通评价定范围线性关系水准确度确定该产品线性范围样类型（涉）应分评价线性范围
4准确度
应国际参考物质国家参考品（）企业部参考品床样进行阳性阴性符合率者方法学研究
5精密度
应影响检测精密度变量进行验证评估重复性重现性包括运行变异运行间日日间批次间操作者间仪器间点间变异
建议设定合理精密度评价周期例期12天检测天2完成少2次完整检测注意应包括核酸分离纯化步骤采床样进行试验少包含3浓度水：阴性样略高低检测限弱阳性样中等阳性样
6特异性
（1）交叉反应
①EB DNA检测试剂交叉反应验证病原体种类考虑方面性：核酸序列具源性易引起相相似床症状（推荐种类见表1）
②建议病毒细菌感染医学相关水进行交叉反应验证通常细菌感染水106 cfumL更高病毒105 pfumL更高
③申请应提供交叉反应验证病毒细菌源种属型浓度确认等试验资料关交叉反应验证信息应列表方式产品说明书产品性指标项中体现
表1 交叉反应研究微生物（推荐）
微生物
水痘带状疱疹病毒（类疱疹病毒3型）
类免疫缺陷病毒*
乙型肝炎病毒
梅毒*
巨细胞病毒（类疱疹病毒5型）
疱疹病毒6型
疱疹病毒7型
疱疹病毒8型
单纯疱疹病毒1型（类疱疹病毒1型）
单纯疱疹病毒2型（类疱疹病毒2型）
甲型流感病毒*
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
腺病毒*
*选验证交叉反应病原体
（2）干扰物质
应针样类型分评价存干扰情况建议种干扰物质潜浓度（差条件）进行评价测物医学决定水进行检测潜干扰物质包括源性外源性已报道干扰物质
样应少选取全血（血红蛋白白细胞）白蛋白胆红素甘油三酯身抗体等进行验证注明测物产生干扰高限值
7需注意问题
适机型产品应提供产品说明书适机型项中列型号仪器性评估资料适样类型应提交样类型致性验证包括抗凝剂采血（涉）验证
（五）阳性判断值研究资料
申请应考虑理区域流行病学背景口统计学特征（包括性域种族等素）差异选择具代表性样建立阳性判断值注意应纳入定数量弱阳性样采研究方法应说明合理性
荧光实时PCR方法结果判读Ct值核酸浓度确定资料包括确定基线阈值（threshold）阈值循环数（Ct）核酸浓度（适）研究资料等
外建议申请考虑建立阳性判断值时受试者样目标群代表性通床评价进步验证确认阳性判断值准确性
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料涉两部分容申报试剂稳定性适样稳定性研究前者包括实时稳定性（效期）运输稳定性开瓶稳定性冻融次数限制等研究申请根实际需选择合理稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法确定具体实施方案详细研究数结实时稳定性研究应提供少三批样品实际储存条件保存成品效期研究资料
应样稳定性进行研究包括冷藏冷冻等条件效期验证合理温度范围选择温度点（温度范围）间隔定时间段储存样进行性分析验证确认类型样效期稳定性适冷冻保存样应冻融次数进行评价
试剂稳定性样稳定性两部分容研究结果均应说明书储存条件效期样求两项中进行详细说明
（七）床评价资料
床试验开展方案制定报告撰写等均应符合相关法规体外诊断试剂床试验技术指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第16号）求
1试验方法
EB病毒核酸检测试剂言床试验采试验体外诊断试剂床普遍认质量较已市类产品进行较研究试验证明两者具等效性间接证明试验体外诊断试剂床性够满足预期途求试剂预期途适群样类型检测性等方面应试验体外诊断试剂具较性
较研究试验中测定结果符样应采床检验实验室已建立参考方法者合理方法（第三方试剂核酸序列测定方法等）进行复核
2试验机构
应考虑拟申报产品特点预期途结合流行病学背景选择具定域代表性试验机构受试者原应具分子生物学方法检测相关学科优势实验操作员足够时间熟悉检测系统环节熟悉评价方案
3试验方案
床试验实施前研究员应设计科学合理床研究方案床研究机构方案设置应基致保证整床试验程中遵循预定方案实施意改动
受试群应全面代表预期适群体外诊断试剂较研究试验中应受试者样设盲检测序机避免操作者检测结果评价者知晓受试者疾病诊断试剂检测结果等信息引入偏倚
试验体外诊断试剂检测应试剂检测步进行避免疾病进程样采集时间造成床试验结偏离真值床试验机构床试验中应统试验操作判读标准等
应明确统计检验假设评价试验体外诊断试剂试剂否等效标准提出适合数统计分析方法建议根预实验结果检测样类型数量提出求
4受试者
EB病毒核酸检测应床症状体征诊断方法相结合EB病毒感染辅助诊断治疗监测等床试验受试者应包括种接受EB病毒核酸感染检查群原发性EB病毒感染相关疾病（传染性单核细胞增症等）慢性活动性EB病毒感染EB病毒感染相关恶性肿瘤（鼻咽癌等）免疫功低（器官移植患者等）者接受免疫抑制剂治疗等群外建议根流行病学证纳入区患者群验证产品床检出力
5样分布
建议少原发性EB病毒感染慢性EB病毒感染EB病毒感染相关恶性肿瘤免疫功低者接受免疫抑制剂治疗等群中均应检测出具EB病毒阳性床结果
中阳性样应包含定数量弱阳性样灰区样检测范围水均分布病例选择时考虑具床症状体征患者等阴性样考虑存交叉反应情况应选择类疱疹病毒感染患者床角度考察特异性
床试验中涉样类型应实际床检测中常样类型时够检测血清血浆样试剂应EB病毒感染患者分采集血清血浆样进行试验研究阳性样应包括强中弱阳性部分阴性样床研究应前瞻性样采回顾性样应行说明
6样量
适样量保证体外诊断试剂床性准确评价必条件床试验样量应满足统计学求采适统计学方法进行估算根预期途设计相应床试验辅助诊断途例床试验试验体外诊断试剂相试剂阴阳性符合率分估算低阴阳性样例数
床样量估算建议采样量公式计算
公式中n样量Z1αZ1β显著性水握度标准正态分布分数位P0评价指标床接受标准PT试验体外诊断试剂评价指标预期值
中阴阳性符合率床接受标准（P0）建议低95获床试验数证明产品相方法阴阳性符合率（置信区间限）低预设床接受标准（P0）评价指标P接100时述样量估算方法适应考虑选择更加适宜方法进行样量估算统计学分析精确概率法等
7统计学分析
床试验结果统计应选择合适统计方法类产品实验等效性研究常相关性线性回相关系数（r）等检测结果进行统计分析考察两组数间否存相关性统计分析应证明两种方法检测结果明显统计学差异床研究方案中应明确统计检验假设评价考核试剂试剂否等效标准选择交叉四格表形式总结两种试剂定性检测结果检验结果进行符合率分析计算阳性符合率阴性符合率总符合率Kappa值等指标信区间
8结果符样
数收集程中两种试剂检测结果致样应进行第三方复核结合受试者床诊断信息差异原进行分析第三方复核结果应纳入统计分析需复核应详细说明理
（八）产品技术求
申请应原材料质量生产工艺稳定前提根申请产品研制前期床评价等结果国家标准行业标准相关文献医疗器械产品技术求编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第9号）关求编写产品技术求
果申报试剂已适国家标准品参考品发布申请应产品技术求中提出检验求
办法规定类产品第三类体外诊断试剂申请应医疗器械产品技术求编写指导原规定附录形式明确原材料生产工艺半成品求附录编制应符合相关编写规范求原材料部分建议包括目标物基位点区域引物探针设计源（包括目标物）种酶源技术指标验收标准质控品设置验证情况等容
（九）产品检验报告
应产品技术求符合办法求医疗器械检验机构进行连续3生产批次样品检验提供检验合格报告
（十）产品说明书
说明书承载产品预期途标采集处理检验方法检验结果解释注意事项等重信息指导实验室工作员正确操作床医生针检验结果出合理医学解释重产品说明书格式应符合体外诊断试剂说明书编写指导原（国家食品药品监督理总局通告2014年第17号）求进口体外诊断试剂中文说明书格式求外容应量保持原文说明书致性翻译力求准确符合中文表达惯产品说明书中相关技术容均应申请提交注册申报资料中相关研究结果保持致某容引参考文献应规范格式容进行标注单独列明文献相关信息
面EB病毒核酸检测试剂说明书重点容进行详细说明
1．预期途
应少包括容：
11试剂盒定量检测体样（全血血浆血清等）中EB DNA适样类型应申报产品分析性评估床研究情况进行确认
12目标物特征：简描述病原体生物学特征致病性感染床表现相关实验室诊断方法等
13目标群：种接受EB病毒核酸感染检查群例原发性EB病毒感染慢性EB病毒感染EB病毒感染相关恶性肿瘤免疫功低者接受免疫抑制剂治疗等群注：未述目标群进行相关床研究产品应项声明：未做相关验证产品相关床预期群
14产品功：结合目标群床表现诊断指标EB病毒感染辅助诊断治疗监测等
2检验原理
21 描述试剂盒检测够覆盖目标基序列特征引物探针设计反应体系（）组合形式质控品设置荧光信号标记等
22 描述核酸提取纯化方法原理等
23 描述试剂盒技术原理结合图示进行说明反应体系中添加相关防止扩增产物污染组分（尿嘧啶DNA糖基化酶）应介绍作机理
3组成成分
31详细说明试剂盒组分名称数量成分浓度等信息含生物源性物质应说明生物学源活性特性说明批号试剂盒中组分否互换
32 果试剂盒中包含核酸分离纯化试剂组分应明确验证推荐配合核酸分离纯化试剂盒生产企业产品名称注册证号（）配合仪器等信息
33试剂盒中包含该项检测必需组分应列出相关试剂生产企业产品名称备案证号注册证号（）等信息
4储存条件效期
说明试剂盒效期稳定性开封稳定性复溶稳定性运输稳定性冻融次数求等应标明具体储存条件效期
5适机型
注明适仪器型号提供仪器关重信息指导户操作
6样求
61样收集求：结合床公认推荐采样求
62血液样应说明采血抗凝剂求：明确样类型采血抗凝剂样应说明样采集处理保存方式
63样处理运送保存：血液样离心条件求核酸提取前预处理运送条件保存条件期限（短期长期）等冷藏冷冻样检测前否需恢复室温冻融次数求需应高检测范围样稀释方法进行规定
7检验方法
描述动分析工作流程者详细说明试验操作步骤例：
71试剂准备配制方法注意事项
72详细描述测样质控品核酸提取纯化方法包括条件步骤注意事项
73扩增反应前准备：加样体积序等
74 PCR阶段温度时间设置循环设置注意事项
75仪器设置：特殊参数结合探针荧光素标记情况设置目标基标荧光通道
76基线循环阈值（Ct值）选择方法
77质量控制方法：试剂盒阴阳性质控品标Ct值范围求
8检验结果解释
结合阳性阴性（标）目标基检测结果列表形式详细描述出现结果组合相应解释Ct值表示存灰区应时说明灰区结果处理方式包括种情况需进行重复检测重复检测方法样采取优化条件（采集求采集方法）等适结合扩增结果S形曲线灰区结果进行判定
9．检验方法局限性
91试剂盒检测结果应结合患者症状体征病史实验室诊断结果等情况进行综合分析解释作患者床诊治理唯
92导致假阴性假阳性结果性分析：
921合理样采集处理运输保存条件样中目标物滴度低
922EB病毒核酸目标基序列变异原导致序列改变
923患者时间部位者次采集样会降低假阴性结果性
924未验证干扰源性外源引入样物质
925样间交叉污染
926未验证交叉反应物质
10产品性指标详述性指标：
101低检出限定量限：说明试剂样类型低检出浓度低定量浓度简单介绍低检出限定量限确定验证方法
102线性范围：确定线性范围方法浓度范围相关系数等信息
103精密度：说明类型样重复性重现性评价结果
104分析特异性：包括交叉反应干扰物质
1041产生交叉反应病原体验证情况建议列表方式描述病原体名称型浓度等信息
1042样中常见干扰物质检测结果影响应注明接受高限值
105床试验：简介绍试验方法受试者样试验结果结等
11注意事项应少包括容：
（1）关源组分（）警告：试剂盒校准品质控品含源物质组分已通乙型肝炎表面抗原（HbsAg）类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV12）丙型肝炎抗体（抗HCV）等项目检测阴性截目前没项检测确保绝安全应组分作潜传染源
（2）床实验室应严格床基扩增实验室工作规范配备设备操作员应严格说明书求进行操作
三参考文献
1国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册理办法（局令第5号）2014年7月
2国家食品药品监督理总局体外诊断试剂床试验技术指导原2014年9月
3国家食品药品监督理总局体外诊断试剂说明书编写指导原2014年9月
4国家食品药品监督理总局体外诊断试剂注册申报资料求批准证明文件格式2014年9月
5全国童EB病毒感染协作组EB病毒感染实验室诊断床应专家识 中华实验床病毒学杂志20182（32）：28
6中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会鼻咽癌标志物专家委员会鼻咽癌标志物床应专家识中国癌症防治杂志20116（11） ：183193
四起草单位
国家药品监督理局医疗器械技术审评中心
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